黃瓜離體培養(yǎng)及根癌農桿菌介導的遺傳轉化體系的研究.pdf

1、黃瓜(Cucumis sativus L)是世界范圍內的重要蔬菜，由于現(xiàn)有栽培品種的遺傳基礎十分狹窄，與黃瓜屬其他野生資源遠緣雜交的親合性很低，采用傳統(tǒng)育種方法很難在短時間內獲得具有對生物或非生物具有抗性的優(yōu)良品種。利用植物基因工程進行對黃瓜現(xiàn)有品種進行遺傳改良是擴大現(xiàn)有資源遺傳基礎的有效途徑。為此，本試驗建立了穩(wěn)定的黃瓜再生、遺傳轉化體系，主要結果如下： 1、黃瓜再生體系的建立：通過比較兩種野生型黃瓜品種的不同外植體，發(fā)現(xiàn)歐洲

2、型黃瓜EP-6適合用子葉為外植體誘導再生植株，華北型黃瓜津春4號適合用莖節(jié)作為外植體誘導再生植株。適合EP-6子葉再生芽的最佳芽誘導培養(yǎng)基為fMS+0.5mg/LABA+2.0mg/L6-BA+2.0mg/LAgNO3)；適合津春4號莖節(jié)再生芽的最佳誘導培養(yǎng)基為(MS+0.5mg/L6-BA)；最佳生根培養(yǎng)基為(1趁MS+15g/L蔗糖十0.6mg/LIBA)。 2、EP-6子葉轉化體系的建立：將子葉在上述最佳誘芽培養(yǎng)基上預培養(yǎng)

3、2d，以菌液pCAMBIA2201/EHA105侵染20min，在含50μmol/LAS的最佳芽誘導培養(yǎng)基中黑暗條件下共培養(yǎng)2d，轉入選擇培養(yǎng)基(最佳誘芽培養(yǎng)基+100mg/LKan+400mg/L，Cef)中篩選抗性芽，光照條件下培養(yǎng)，25d左右有抗性芽長出時轉入伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)。抗性芽2cm左右時轉入生根培養(yǎng)基，獲得抗性株系，伸長培養(yǎng)和生根培養(yǎng)時添加60mg/L Kan和400mg/L，Cef進行篩選。 3、津春4號的莖節(jié)轉

4、化體系的建立：將莖節(jié)在最佳誘芽培養(yǎng)基上預培養(yǎng)2d，以菌液pCAMBIA2201/EHA105侵染20min，在含50μmo/LAS的最佳芽誘導培養(yǎng)基中黑暗條件下共培養(yǎng)2d，轉入選擇培養(yǎng)基(最佳誘芽培養(yǎng)基+120 mg/LKan+400 mg/LCef)中篩選抗性芽，光照條件下培養(yǎng)，12d左右有抗性芽長出時轉入伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？剐匝?cm左右時轉入生根培養(yǎng)，獲得抗性株系，伸長培養(yǎng)和生根培養(yǎng)時添加80mg/L Kan和400mg/L Ce