感染性疾病的實驗診斷

1、第八章 感染性疾病的實驗診斷,海南醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科林尤仕,第六節(jié) 肝炎病毒感染標志物的檢測,目前已經發(fā)現(xiàn)的病毒性肝炎主要有5 型，即甲型（HA）、乙型（HB）、丙型（HC）、丁型（HD）和戊型（HE），它們分別由甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒引起。一般實驗室可通過檢查相關病毒的血清標志物來獲取肝炎病毒的感染和轉歸情況。由于肝炎標志物的種類較多，選擇時應結合流行病學特點和臨床特點。,各種類型的肝炎病毒的傳播途徑,甲型肝炎病毒與

2、戊型肝炎病毒由消化道傳播，引起急性肝炎，不轉為慢性肝炎或慢性攜帶者。乙型與丙型肝炎病毒主要由輸血、血制品或注射器污染而傳播，除引起急性肝炎外，可致慢性肝炎，并與肝硬化及肝癌相關。丁型肝炎病毒為一種缺陷病毒，必須在乙型肝炎病毒的存在下才能復制。,一、甲型肝炎病毒,Hepatitis A virus, HAV,小RNA病毒科 肝RNA病毒屬,1、標本采集血清：采集到急性期和恢復期的血清。糞便：發(fā)病前2周內或出現(xiàn)癥狀后幾天采集

3、。2、參考范圍抗HAV-IgM、抗HAV-IgA：陰性。HAV抗原：陰性。HAV-RNA：陰性。3、檢測方法：抗原和抗體的檢測用ELISA。 HAV-RNA的檢測用PCR。,4、臨床意義（1）抗 HAV-IgM陽性率在發(fā)病后2周最高，約6個月后轉為陰性，抗 HAV-IgM陽性說明機體正在感染HAV，它是早期診斷甲肝的特異性指標。（2）抗HAV-IgG陽性提示既往感染，

4、可作為流行病學調查的指標。（3）HAV-RNA陽性對診斷HAV感染具有特異性。,二、乙型肝炎病毒,HBV屬 嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae),,土撥鼠肝炎病毒（WHV）地松鼠肝炎病毒 (GSHV)鴨乙型肝炎病毒（DHBV）蒼鷺乙型肝炎病毒（HHBV）,HBV的發(fā)現(xiàn)源于表面抗原的研究。 1963年Blumberg首先在澳大利亞土著人血清中發(fā)現(xiàn)一種新抗原，稱為澳大利亞抗原（Australia antigen）；直至1

5、968年確定這種抗原與血清型肝炎密切相關，稱為肝炎相關抗原（hepatitis associated antigen，HAA）；1970年D.S. Dane在肝炎患者血清中發(fā)現(xiàn)具有傳染性的顆粒，即Dane顆粒（Dane's particle）。從而HBV被確認。 HBV是乙型肝炎病原體，主要經輸血、注射、性行為和母嬰傳播。起病徐緩，部分患者可轉為慢性，少數還可導致肝硬化和肝癌。,HBV形態(tài)結構,（三種形態(tài)的病毒顆粒）,,

6、大球形顆粒（Dane顆粒）,,,小球形顆粒,管形顆粒,電鏡下的HBV,1、標本采集：血清2、檢測方法：抗原抗體定性用ELISA?？乖贵w的定量檢測用化學發(fā)光免疫分析。核酸分析（HBV-DNA）用PCR。3、參考范圍HBsAg和HBeAg和抗HBe、HBV-DNA以及抗HBcIgM和抗HBcIgG均為陰性，抗HBs陰性或者<10IU\L，注射乙肝疫苗后陽性為接種成功。,乙肝抗原抗體檢測,HBsAg/抗HBsHBeAg/

7、抗HBe 抗HBc 俗稱“二對半” 或“乙肝五項”。 檢測“二對半”的目的是判斷有無HBV感染及其感染狀態(tài)如何。,4、臨床意義（1）乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg） HbsAg為HBV中Dane顆粒外層的脂蛋白囊膜，其編碼基因位于HBV雙鏈DNA的S區(qū)。HbsAg在感染后1- 2個月出現(xiàn)于血清中，可持續(xù)數周數月甚至數年。慢性乙型肝炎及攜帶者HBsAg 可呈陽性。

8、患急性乙肝后HBsAg陽性持續(xù)6個月以上、肝功能異常、HBV-DNA陽性者可能發(fā)展為慢性乙肝或者肝硬化，應積極治療。HBsAg無癥狀持續(xù)陽性6個月以上或者持續(xù)多年，肝功能正常、HBV-DNA陰性者，可進行醫(yī)學觀察，不必治療。,（2）乙肝病毒表面抗體（ HBsAb） HBsAb是目前公認的針對HBsAg的保護性抗體，

9、 它對HBsAg有一定的中和作用，是機體具有免疫力的標志。 【臨床意義】 陽性見于①既往感染過HBV，現(xiàn)已恢復，陽性可持續(xù) 多年。②注射過乙肝疫苗或者HBsAb免疫球蛋白者。,（3）乙肝病毒e抗原（HBeAg) HBeAg是HBV核心顆粒中的一種可溶性蛋白質，具有抗原性?！九R床意義】 HBeAg陽性表明乙肝病毒處于復制期，具有較強的傳染性。如患者

10、HBeAg持續(xù)陽性，表明肝細胞損害較重，可發(fā)展為慢性乙型肝炎或者肝硬化，孕婦則可以引起垂直傳播給新生兒。,（4）乙肝病毒e抗體（HBeAb) HBeAb是乙肝患者或者攜帶者經HBeAg刺激后產生的一種特異性抗體，繼HBsAb后出現(xiàn)于血液中，未具有保護性。HBeAb陽性表示大部分乙肝病毒被消除，病毒復制減少，傳染性減低。一些慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者可陽性。,（5）乙肝病毒核心抗體（HBcAb) HBcAb

11、有IgM、IgG、IgA三種，一般實驗室通常檢測抗HBc總抗體和IgM類抗體?？笻Bc總抗體對機體無保護作用，陽性可持續(xù)數年甚至終生，見于急、慢性乙肝，肝癌病人及部分HBsAg陰性者?？笻Bc-IgM抗體陽性是HBV近期感染的敏感指標，也是HBV在體內持續(xù)復制的指標，提示病人有傳染性，抗HBc-IgM抗體陰轉，提示乙肝逐漸恢復。,（6）HBV血清學標志物檢測常見結果的解釋,三、丙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒（Hepatitis C vi

12、rus，HCV）引起丙型肝炎。 HCV主要經血或血制品傳播，目前占輸血后肝炎的80%～90%。在我國丙型肝炎流行率為2.1%。其臨床和流行病學特點類似乙型肝炎，但癥狀較輕，演變?yōu)槁哉叨嘁?，部分患者可發(fā)展為肝硬化或肝癌。,目前對HCV尚不能通過血清分型，而根據基因序列同源性及親緣關系分析可將世界各地分離到的毒株分為Ⅰ～Ⅵ型6個基因型，每個型又可分為亞型 (a、b、c表示)。歐美流行株多為Ⅰ型，而亞洲和我國流行的多為Ⅱ型。,1、標

13、本采集：血清2、檢測方法抗體檢測用ELISA或者化學發(fā)光免疫分析。HCV-RNA檢測用PCR。3、參考范圍：HCV抗體為陰性， HCV-RNA陰性。,HCV的形態(tài)結構,4、臨床意義1、抗 HCV-IgM陽性見于急性HCV感染，具傳染性，約6個月后轉為陰性，否則容易轉為慢性丙型肝炎；2、抗HCV-IgG陽性提示既往感染；3、在疾病早期如果HCV抗體陰性，可做HCV-RNA檢測，以排除HCV感染。,四、丁肝病毒,HDV

14、是一種缺陷病毒，必須依賴嗜肝DNA病毒才能復制。由HBsAg構成其外殼HDV定位于肝細胞核內，在血液中由HBsAg包被，形成35-37nm顆粒單負鏈環(huán)狀RNA,HDV的結構,丁肝特點只能感染HBsAg陽性的病人Coinfection -- concurrent infection at the same time; Superinfection -- HDV infection occurs on carriers of H

15、BV. 我國丁肝感染率在1.6%-5%，西南地區(qū)HDV感染使慢性乙肝病情加重和惡化,五、戊型肝炎病毒,1989年在美國夏威夷召開的國際肝癌會上，將腸道傳播的非甲非乙型肝炎病毒正式命名為戊型肝炎病毒（hepatitis E virus, HEV），是戊型肝炎（hepatitis E，HE）的病原體。 戊型肝炎主要經糞－口途徑傳播常引起大流行，其臨床和流行病學特點類似甲型肝炎。,五 種 肝 炎 病 毒 比 較,第七節(jié) 性傳播

16、疾?。⊿TD）的實驗診斷,性傳播疾病(STD),傳統(tǒng)性病-通過性交傳染-主要病變發(fā)生在外生殖器--梅毒--淋病--軟下疳--性病性淋巴肉芽腫--腹股溝肉芽腫,現(xiàn)代性病-各種性接觸-主要病變發(fā)生在外生殖器及非生殖器部位-20余種--AIDS --非淋菌尿道炎--尖銳濕疣--生殖器皰疹--念珠菌病--滴蟲--巨細胞病毒感染--疥瘡--陰虱 --乙肝 …,概 況,每年新發(fā)3.4億 位居傳染病第

17、3位梅毒增長艾滋病擴大嚴峻考驗 社會問題,一 梅毒,是由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性全身性性傳播疾病主要通過性交或從母體通過胎盤傳入侵犯多系統(tǒng)多臟器重點防治STD之一,二期梅毒,梅毒分期,根據傳播途徑--獲得性--胎傳,根據病期(2年或2歲為界)--早期(一期,二期)--晚期(三期),一期梅毒,1、標本采集（1）病灶滲出物：用以電鏡觀察及熒光抗體染色。（2）血清、腦脊液：用于抗體檢測。2、檢測

18、方法：顯微鏡檢查、血清學實驗、PCR。,三期梅毒,3、臨床意義（1）顯微鏡檢查：暗視野顯微鏡檢查 是診斷早期梅毒唯一可靠的實驗室方法，特別是血清學反應陰性者，鏡檢陽性有確診意義。 直接免疫熒光檢查 彌補了暗視野顯微鏡法的缺點，可用于口腔病灶的檢查。鍍銀染色法 梅毒螺旋體染成棕黑色，背景染成淡棕色。,早期先天梅毒,（2）血清學實驗 是診斷梅毒的主要方法分為兩大類 ：①非梅毒螺旋體抗原血清試驗 （篩選實驗）性病研究

19、實驗室試驗（VDRL） ：主要用于腦脊液的檢測，因抗原制備復雜，已少用。不加熱血清反應素試驗（USR）：為VDRL的改良方法快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）：膠體炭作為指示劑（常用）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）：甲苯胺紅作為指示劑（常用）,②梅毒螺旋體抗原血清試驗 以梅毒螺旋體膜蛋白為抗原，檢測梅毒IgG和IgM抗體。（確診實驗）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）：是一種間接免疫熒光法，被認為是檢測梅

20、毒的金標準。梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA）和梅毒螺旋體明膠凝聚實驗（TPPA）。③ PCR：是最為理想的梅毒初篩方法。它可以最大限度的檢出各期梅毒。同時保證了敏感性和特異性。,常見的實驗室檢查為初篩實驗+確診實驗同時檢測。如TRUST+TPHA檢測。結果意義如下：1、TRUST-,TPPA- 可基本排除梅毒。極早期梅毒（無任何抗梅毒抗體產生）。極晚期梅毒。艾滋病病人合并梅毒感染。 2、TRUST+,TPPA+ 現(xiàn)正梅毒，應

21、考慮治療。3、TRUST-,TPPA+ 極早期梅毒、|晚期梅毒、治愈的早期梅毒（應詢問病人是否有既往的梅毒感染和治療史;若病人否認有既往史）。解釋漏檢4、TRUST+,TPPA- TRUST 假陽性,梅毒螺旋體TPHA試驗,二、獲得性免疫缺陷綜合征,（艾滋病、AIDS）,什么是艾滋病？,艾滋病艾滋病病毒,簡稱：AIDS,簡稱：HIV,AIDS是一種由HIV侵入人體后破壞人體免疫功能，使人體發(fā)生多種不可治愈的感染和腫瘤，最后導致

22、感染者死亡的一種嚴重傳染病。,概 念,主要侵犯CD4+T淋巴細胞--機體細胞免疫功能部分或全部喪失--發(fā)生條件致病菌感染及惡性腫瘤,艾滋病離我們并不遙遠,存活感染者 自己知道 自己不知道全球： 3800萬 800萬 3000萬中國： 84萬 6萬 78萬,哇！有這么多人不知道自己感染。我是否..你

23、呢?,我國有94%的感染者處于無關懷、無指導的狀態(tài)，成為活躍的傳染源。,艾滋病的發(fā)現(xiàn),AIDS全球流行情況,近20年AIDS全球流行2003年底艾滋病感染者及AIDS存活者 4000萬，其中新感染500萬(兒童70萬)2007—3200萬大多數在發(fā)展中國家--AIDS全球流行形式嚴峻--醫(yī)學問題--社會問題,艾滋病流行已成為全球第四位死亡原因,AIDS中國流行情況,我國85年第一例2001，9，HIV/AIDS—28133

24、例，死641例2003年底艾滋病感染者及AIDS 已達到85萬2007--AIDS中國流行形式嚴峻快速增長期及艾滋病期,,,,,,,,MSM 同性戀,Drug Users 吸毒者,Sex workers性工作者,General Population 一般人群,Family家庭,Children兒童,Source Population 源頭人群,Bridge Population

25、 橋梁人群,傳播模式由高危人群開始，傳播到一般人群全球共同模式,口腔毛狀粘膜白斑,脂溢性皮炎,卡波西肉瘤（KS）,肺部卡氏肺曩蟲肺炎,,診斷,流行病學臨床表現(xiàn),病原體實驗室檢查--HIV病毒分離培養(yǎng)--抗體檢測--抗原--病毒核酸（PCR）免疫缺陷實驗室檢查--外周血淋巴細胞或CD4+細胞計數(小于0.2×109/L),診斷,HIV感染--初篩及確證試驗陽性,AIDS--HIV抗體（+）加

26、下述一項確診--減重10%+發(fā)熱一月 或減重10%+腹瀉 或明顯霉菌及其它致病菌感染 或卡氏肺曩蟲肺炎 或KS 青年呆癡,我國艾滋病病例診斷標準  1、HIV感染者：受檢血清初篩試驗陽性，確證試驗如蛋白印跡法陽性。2、確診病例：（1）艾滋病病毒抗體陽性，又具有下述任何一項者，可為確診艾滋病病人。,①近期內（3~6個月）體重減輕10%以上，且持續(xù)發(fā)熱達38度C1個月以上。②近期內（3~6個月）體

27、重減輕10%以上，且持續(xù)腹瀉（每日達3~5次）1個月以上。③卡氏肺囊蟲性肺炎（PCP）。④卡波濟肉瘤（Kaposi）。⑤明顯的霉菌或其它條件致病菌感染。,（2）若HIV抗體陽性者體重減輕、發(fā)熱、腹瀉癥狀接近上述第1項標準且具有以下任何一項時，可為確診艾滋病病人。①CD4 /CD8淋巴細胞計數比值<1，CD4細胞計數下降。②全身淋巴結腫大。③明顯的中樞神經系統(tǒng)占位性病變的癥狀和體征、出現(xiàn)癡呆，辨別能力喪失、或運動神經功能障礙

28、。,,三、生殖器皰疹,生殖器皰疹是由單純皰疹病毒（HSV）引起的生殖器部位感染的一種性病，好發(fā)于中青年人，主要通過性接傳播，也可通過母嬰傳播，其它途徑傳播較為少見。臨床上以肛門及外生殖器部位反復發(fā)生成群的小水皰為特征。孕婦患病，可通過胎盤或產道將疾病傳染給胎兒或新生兒，引起死胎、死產或新生兒皰疹病毒感染等。,生殖器皰疹主要根據有婚外性接觸史或配偶感染史結合臨床表現(xiàn)而做出初步診斷。要進一步確診則需做如下檢查 ： 1、細胞學檢查(Tza

29、nk涂片) 2、病毒抗原檢測 3、病毒培養(yǎng),1．細胞學檢查(Tzank涂片) 取一消毒的載玻片做皰底印片，以Wright染色或Giemsa染色后鏡檢，在顯微鏡下見到具有特征性的多核巨細胞或核內包涵體者可確診。2．病毒抗原檢測 從皮損處采集標本，以單克隆抗體直接免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測單純皰疹病毒抗原，陽性者可確診。3．病毒培養(yǎng) 從皮損處采集標本作病毒培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)有單純皰疹病毒

30、和細胞病變者可確診。,四、尖銳濕疣,由人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的鱗狀上皮增生性疣狀病變傳播途徑：主要為性接觸直接傳播臨床癥狀：不明顯，部分可有外陰騷癢、灼熱痛或性 交后痛 典型體征：初為小而尖、孤立或成簇、粉或白色丘疹 逐漸融合呈雞冠狀或菜花狀，頂可有潰瘍,尖銳濕疣實驗室檢查與診斷細胞學檢查：挖空細胞、角化不良細胞 醋酸試驗

31、：（+）陰道鏡檢查：提高醋酸試驗陽性率病理檢查 ：鱗狀上皮增生，呈乳頭狀生長核酸檢測 ：PCR診斷：典型病例肉眼可作出診斷； 不典型者，需進行實驗室檢查,第八節(jié) 部分新發(fā)傳染病的實驗診斷,一、嚴急性呼吸綜合征（SARS）,傳染性非典型肺炎是由一種新的冠狀病毒（SARS相關冠狀病毒）引起的急性呼吸系統(tǒng)傳染病。又稱為嚴重急性呼吸綜合征（SARS）。臨床上以發(fā)熱、頭痛、肌肉酸痛、乏力、干咳少痰為特征。,實驗室特征