液相色譜梯度分析法簡單介紹

1、液相色譜梯度分析法簡單介紹液相色譜梯度分析法簡單介紹西安瑞聯(lián)質量部王斌強1.原理原理液相色譜是根據不同溶質在流動相和固定相之間保留的差異進行分離和測定的方法。通常用容量因子k來表征溶質保留值得大小，k，=(tRt0)t0，k越大則該物質保留越強。容量因子k隨固定相、流動相濃度c、溫度的不同而變化。在固定相溫度不變的情況下有以下關系式：lnk=Zlncb(Z和b為常數)由此可見，隨流動相濃度c增加，容量因子k減小。Z是每種物質的特征參數，

2、小分子Z一般為35，大分子Z一般為10100。對于小分子的樣品，我們可以通過采用合適濃度的流動相來使每種物質得到分離，即平常所用的等度液相色譜分析。若對于一個既有小分子，又有大分子的樣品（如含聚合物），由于Z相差較大，在相同的流動相濃度下，容量因子k差距就非常大，簡單的講，在等度情況下，有時小分子的保留時間在45min，大分子保留時間可能在100min以上，更有甚者在有限的時間內不出峰。梯度分析法就是為解決這個問題產生的。它是采用特殊的

3、設備使流動相的濃度隨時間變化，對保留弱的用濃度小的流動相，對保留強的用濃度大的流動相，使各組分較為均勻的流出。例如對于某樣品用60％流動相、80％流動相和梯度（30min內從60％100％）的分離效果如下。60％流動相05101520020406080100120140tmv另一種是高壓梯度，它是靠兩個或更多的輸液泵不同流速來直接實現各流動相的比例，例如需控制A:B=40:60，總流速為1mLmin時，直接設A泵流速0.4mLmin，B

4、泵流速0.6mLmin。實際上我們只需設B液的比例和總流速，儀器會自動設置A泵流速。從以上我們可以看出低壓梯度設備便宜，但流動相比例精度不夠，而且存在濃度梯度延遲。高壓梯度設備較貴，精度好，濃度梯度延遲很小。目前我們所用的就是高壓梯度，它由兩個泵組成，用光纖連在一起，一個主泵一個付泵，由主泵控制付泵，G.E.燈亮的是主泵。設置方法：按FUNC鍵一直到顯示SYS，主泵設為2，付泵設為1。梯度設置方法：我們只需設置一個時間段兩端時間點和該時