核酸探針技術在食品檢測中的應用

1、1科目：食品生物技術導論學院：化學生物與材料科學學院專業(yè)：生物技術班級：090551學號：09055106姓名：黃菁3核酸探針技術原理是堿基配對。互補的兩條核酸單鏈通過退火形成雙鏈，這一過程稱為核酸雜交。核酸探針是指帶有標記物的已知序列的核酸片段，它能和與其互補的核酸序列雜交，形成雙鏈，所以可用于待測核酸樣品中特定基因序列的檢測。每一種病原體都具有獨特的核酸片段，通過分離和標記這些片段就可制備出探針，用于疾病的診斷等研究。(一)核酸探針

2、的種類1.按來源及性質劃分可將核酸探針分為基因組DNA探針、cDNA探針、RNA探針和人工合成的寡核苷酸探針等幾類。作為診斷試劑，較常使用的是基因組DNA探針和cDNA探針。其中，前者應用最為廣泛，它的制備可通過酶切或聚合酶鏈反應(PCR)從基因組中獲得特異的DNA后將其克隆到質粒或噬菌體載體中，隨著質粒的復制或噬菌體的增殖而獲得大量高純度的DNA探針。將RNA進行反轉錄，所獲得的產(chǎn)物即為cDNA。cDNA探針適用于RNA病毒的檢測。c

3、DNA探針序列也可克隆到質粒或噬菌體中，以便大量制備。將信息RNA(mRNA)標記也可作為核酸分子雜交的探針。但由于來源極不方便且RNA極易被環(huán)境中大量存在的核酸酶所降解，操作不便，因此應用較少。用人工合成的寡聚核苷酸片段做為核酸雜交探針應用十分廣泛，可根據(jù)需要隨心所欲合成相應的序列，可合成僅有幾十個bp的探針序列，對于檢測點突變和小段堿基的缺失或插入尤為適用。2.按標記物劃分有放射性標記探針和非放射性標記探針兩大類。放射性標記探針用放

4、射性同位素做為標記物。放射性同位素是最早使用，也是目前應用最廣泛的探針標記物。常用的同位素有32P、3H、35S。其中，以32P應用最普遍。放射性標記的優(yōu)點是靈敏度高，可以檢測到Pg級；缺點是易造成放射性污染，同位素半衰期短、不穩(wěn)定、成本高等。因此，放射性標記的探針不能實現(xiàn)商品化。目前，許多實驗室都致力于發(fā)展非放射性標記的探針。目前應用較多的非放射性標記物是生物素(Biotin)和地高辛(digoxigenin)。二者都是半抗原。生物素