熒光光度法測(cè)定血清中堿性磷酸酶

1、熒光光度法測(cè)定血清中堿性磷酸酶熒光光度法測(cè)定血清中堿性磷酸酶首席醫(yī)學(xué)網(wǎng)2009年05月20日13:47:33Wednesday237?中華臨床醫(yī)師雜志征稿?顱腦解剖技術(shù)研修班?肝病學(xué)科新進(jìn)展研修班?心律失?，F(xiàn)代診療會(huì)議?醫(yī)學(xué)類核心期刊征稿?老年疾病循證應(yīng)用會(huì)議?小兒心血管疾病會(huì)議?第13屆國(guó)際急診學(xué)大會(huì)?臨床檢驗(yàn)及設(shè)備展覽會(huì)?白內(nèi)障人工晶狀體會(huì)議?全國(guó)疑難重癥肝病大會(huì)?四屆長(zhǎng)城國(guó)際男科論壇?2010世界心臟病學(xué)大會(huì)?泌尿外科學(xué)臨床研修班

2、?股骨頭壞死修復(fù)論壇作者：張娜邊瑋瑋李耀輝作者單位：黃山學(xué)院化學(xué)系，黃山245041濰坊醫(yī)學(xué)院，濰坊261041加入收藏夾《航空航天醫(yī)藥》由中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部、...中華現(xiàn)代臨床護(hù)理學(xué)雜志征稿[吸入性肺炎常規(guī)治療7例][新生兒溶血病]60例肝癌介入術(shù)后并發(fā)癥的觀察和護(hù)理2型糖尿病患者自主神經(jīng)病變與血糖控制淺談局部壓迫治療小腿淋巴漏的臨床體會(huì)RF540型熒光分光光度計(jì)和UV265型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）；PHS3

3、B型酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）；離心機(jī)（上海手術(shù)機(jī)械廠）。2.2試劑水楊酸磷酸酯(SP)參照文獻(xiàn)[15]合成并純化，將10.0gSA與15.0gPCl5混合使之在室溫下反應(yīng)，直到反應(yīng)平緩下來(lái)，然后用60～65℃水浴攪拌加熱1.5h。用冰水浴將反應(yīng)混合物冷卻，然后依次加入25mL苯、25mL丙酮和3.5mL水。將混合物冰水冷卻30min后，加入50mL苯，再放置24h。經(jīng)真空干燥過(guò)夜后，用丙酮和苯的混合物重結(jié)晶，可得7.99gSP（產(chǎn)率約5

4、1%）。測(cè)得其熔點(diǎn)為163～165℃，與文獻(xiàn)[15]報(bào)道的162.5～163℃基本符合。底物C、H含量用元素分析儀（美國(guó)PE2400）測(cè)定（%，括號(hào)為理論值）：測(cè)得值為：C38.50（38.54）H3.26（3.24）。工作液的配制：準(zhǔn)確稱取0.1090gSP，溶于少量0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)中，并以此緩沖溶液定容至500mL容量瓶，得1.00mmolL工作液（可穩(wěn)定一個(gè)月以上）。堿性磷酸酶(ALP，分析

5、純，Sigma公司，17Umg)儲(chǔ)備液的配制：準(zhǔn)確稱取0.0441gALP，溶于少量0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH=9.0)中，并以此緩沖溶液定容至250mL容量瓶，得3.00UmL儲(chǔ)備液。使用時(shí)以0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)逐級(jí)稀釋得工作液。水楊酸(SA，分析純，北京化學(xué)試劑公司)工作液的配制：準(zhǔn)確稱取0.0691gSA，溶于少量0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)中，并以此

6、緩沖溶液定容至500mL容量瓶，得1.00mmolL工作液。儲(chǔ)備液與工作液均需置于0～4℃的生化培養(yǎng)箱內(nèi)保存。0.10molLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)。其余所用試劑均為分析純，所有實(shí)驗(yàn)用水均為石英亞沸蒸餾水。2.3實(shí)驗(yàn)方法于10mL比色管中依次加入1.0mL1.00mmolLSP、2.0mLTrisHCl緩沖溶液(pH9.0)和0.10mL0.30ULALP，以石英亞沸蒸餾水定容至刻度，振蕩搖勻，37.0℃水浴放置10m

7、in，用1cm熒光池（附有自動(dòng)恒溫裝置），記錄其熒光光譜。同時(shí)在λexλem=303412nm測(cè)定熒光強(qiáng)度F，同時(shí)測(cè)定試劑空白的熒光強(qiáng)度F0。經(jīng)過(guò)酶反應(yīng)后，增強(qiáng)的熒光強(qiáng)度以ΔF（ΔF=F－F0）表示。3結(jié)果與討論結(jié)果與討論3.1ＳＡ和ＳＰ的熒光光譜SA溶液、SP溶液和SPALP混合后體系的熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜見圖1。酶反應(yīng)后所得產(chǎn)物SA分子具有強(qiáng)的共軛π鍵，剛性結(jié)構(gòu)以及給電子基團(tuán)(OH)，因此SA熒光較強(qiáng)。合成的SP將SA分子中的給