酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書

1、4(TLR4)elisaimmuneelisakitManualfile1799270Fromcollectsclassifiestheglobalproductinstrunctionmanualstohelpusersaccessanytimeanywherehelpingusersmakebetteruseofproducts.Home:Chinese:ThisManual:file1799270實驗原理實驗原理實驗原理實驗原理將

2、TLR4抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中依次加入標準品和標本，其中的TLR4與連接于固相載體上的抗體結合，洗板之后加入生物素化的TLR4抗體，將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標記的親和素，再次徹底洗滌后加入底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TLR4呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（值），計算樣品濃度。標本的采集與保存標本的采

3、集與保存標本的采集與保存標本的采集與保存1、血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置30分鐘或4過夜，然后1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于20或80保存，但應避免反復凍融。2、血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于281000g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于20或80保存，但應避免反復凍融。3、組織勻漿：將動物的組織標本先用PBS洗滌，去除多余血液，勻漿化后放在5~1

4、0mlPBS中于20℃放置過夜，第二天，經(jīng)過二次反復凍融破膜，將勻漿物5000xg離心5分鐘，取上清即可檢測。4、其它生物標本：請1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于20或80保存，但應避免反復凍融。注意：注意：注意：注意：1、以上標本均需密封保存，4保存應小于1周，20不應超過1個月，80不應超過2個月。2、標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。3、標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。試劑

5、準備試劑準備試劑準備試劑準備1、使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(1825)，試劑不能直接在37溶解。2、標準品標準品（凍干品）：每瓶標準品用標準品稀釋液標準品稀釋液稀釋至1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒搓動以助溶解，其濃度為100ngmL(貯液)。先將其稀釋為10ngmL(標準曲線最高濃度)后，再準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入500的標準品稀釋液標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成10ngmL，5n

6、gmL，2.5ngmL，1.25ngmL，0.625ngmL，0.312ngmL，0.156ngmL，標準品稀釋液（0ngmL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。TubeTubeTubeTube111122223333444455556666777788889999ngmLngmLngmLngmL1001001001001010101055552.52