動物生物制品的制備

1、第二章 動物生物制品的制備,第一節(jié) 一般生物制品的制備方法,一、原料的選擇、預處理和保存方法,1.原料的選則 生物原料可來源于人體、動物、植物、微生物及海洋生物的生物組織或分泌物，也可以來源于人工構(gòu)建的工程細菌、工程細胞及人工免疫的動植物,1.原料的選則,（1）.注意事項：注意最佳生長時期（2）.選擇原料時應遵循的原則：原料來源豐富，產(chǎn)地接近，成本低；原料新鮮雜質(zhì)含量少，起始原料質(zhì)量穩(wěn)定,2、原料的預處理,生物材料

2、動物材料植物材料微生物材料,3.原料的保存方法,1）冷凍 2）有機溶劑脫水3）防腐劑保鮮,二、目的產(chǎn)物的提取,1.組織細胞破碎 高壓勻漿 高速珠磨 超聲破碎 壓力法 反復凍融 化學滲透 酶溶破碎,2.固液分離 離心 雙水分配 膜過濾 微濾 超濾 反滲透,三、.目的產(chǎn)物的分離

3、純化,在去除各種雜質(zhì)的同時將目的產(chǎn)品成分進行富集與濃縮純度、提純倍數(shù)、收獲率分級沉淀、超濾、電泳、層析……,第二節(jié) 各類生物制品的分離純化方法,,一、蛋白質(zhì)類制品的分離純化方法,1.根據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小、形狀和密度差異進行的分離純化（1）.過濾和超過率技術(shù)（2）.離心和超離心技術(shù)（3）.凝膠過濾層析技術(shù)（4）.透析,2.利用蛋白質(zhì)電性進行分離純化,（1）.等電點沉淀（2）.離子交換層析技術(shù)（3）.電泳和等點聚焦電泳,

4、3、利用蛋白質(zhì)的親水性和疏水性進行分離,（1）.鹽析技術(shù)（2）.乙醇和聚乙二醇沉淀法（3）.疏水層析法,4.利用蛋白質(zhì)的化學性質(zhì)分離純化,（1）.辛酸沉淀法（2）.利凡諾沉淀法（3）.固相化染料柱層析（4）.螯合柱層析,二、核酸類制品的分離純化方法,1.提取環(huán)烷酸2.對提取的核酸制品進行純化 1）.鹽析法及沉淀法 2）.離心法 3）.膜分離法,三、多糖的分離純化方法,,四.脂類的分離純化方法

5、,,第三節(jié) 強毒菌(毒)種的選育,病原分離純粹試驗 致病性 免疫原性 篩選出適用毒株，分裝，凍干保存,,,,,,,三、弱毒菌(毒)種選育,傳統(tǒng)方法培育弱毒活疫苗種和病毒種,利用病原自然弱毒株 LaSota、牛痘、鴿痘經(jīng)典方法誘變?nèi)醵局赀x育 化學途徑：亞硝酸基胍 物理途徑：熱、干燥、射線等 生物

6、途徑：適應非易感動物 適應細胞 雜交減毒,第四節(jié) 細菌增殖技術(shù),,一、細菌繁殖規(guī)律與生長條件,細菌的營養(yǎng) ： 水、碳、氮、鹽類、生長因子等,細菌生長的條件： 氣體、溫度、PH值、滲透壓,細菌繁殖規(guī)律：二分裂法 遲緩期、對數(shù)增殖期、穩(wěn)定期、衰退期,二、細菌的分離與培養(yǎng),需氧菌的分離培養(yǎng)1．平板分離培養(yǎng)法：平

7、板劃線分離培養(yǎng)法、傾注培養(yǎng)法2．需氧芽胞菌的分離培養(yǎng)法3．利用化學藥品抑茵的分離培養(yǎng)4．通過實驗動物分離法,厭氧菌的分離培養(yǎng),1．生物學方法：在培養(yǎng)基中加入動植物組織2．化學方法保險粉法：利用連二亞硫酸鈉（Sodium hydrosulphite）和碳酸鈉以吸收空氣中的氧焦性沒食子酸法：焦性沒食子酸在堿性溶液中能吸收大量氧氣硫乙醇酸鈉法：硫乙醇酸鈉（HSCH2COONa）是一種還原劑，能除去氧或還原氧化型物質(zhì)3．物理學方

8、法：加熱、密封、抽氣等,含二氧化碳條件下細菌分離培養(yǎng),有些細菌特別是初次分離培養(yǎng)，要在含有5%～ 10％CO2。蠟燭缸法二氧化碳培養(yǎng)箱,三、工業(yè)化大生產(chǎn)中細菌培養(yǎng)方法,1、固體培養(yǎng)基表面培養(yǎng)法：用于制備抗原、滅活苗苗或凍干苗苗2、液體靜置培養(yǎng)法：適于一般菌苗的生產(chǎn),,3、液體深層通氣培養(yǎng)法：適于大量的培養(yǎng)，菌苗生產(chǎn)中的主要培養(yǎng)方法。 反應缸4、透析培養(yǎng)法：培養(yǎng)物與培養(yǎng)基之間隔一層半透膜的培養(yǎng)方法。

9、 發(fā)酵器透析培養(yǎng)系統(tǒng),三、細菌計數(shù)技術(shù),總菌數(shù)計數(shù)法1．顯微鏡直接計數(shù)：利用血細胞計數(shù)器2．直接涂片計數(shù)法：數(shù)出紅細胞與菌數(shù)之比3．過濾計數(shù)法：測定空氣或水中的細菌數(shù)4．比濁計數(shù)法：麥氏比濁管,,活菌計數(shù)法： 通常用菌落形成單位（CFU）表示1．傾注平板培養(yǎng)2．平板表面散布法3．微量點板計數(shù)法4、其他方法：玻璃片瓊脂薄層法、還原試驗法、大腸菌群最近似數(shù)測定法、過濾計數(shù)法等5、新技術(shù)方法：如生物發(fā)光法、

10、放射測量法，鱟試驗法，電阻抗測量法等,第五節(jié) 病毒增殖技術(shù),,一、病毒的增值,病毒的增殖過程包括吸附、穿入、脫殼、病毒成分的合成、裝配與釋放等步驟。,吸 附,,,,吸附,與溫度有一定關(guān)系，37℃時吸附最好 要求病毒附加蛋白質(zhì)細胞感受器,穿 入-----質(zhì)膜溶解,,皰疹病毒, 副粘病毒, 艾滋病病毒HIV,,穿入----通過形成內(nèi)涵體,,,,,,,,,,,,,,,,,穿入----通過形成內(nèi)涵體,,,,,,,,穿入-----有囊膜病

11、毒,from Schaechter et al, Mechanisms of Microbial Disease, 3rd ed, 1998,穿入-----無囊膜病毒,,,,,,,,直接通過質(zhì)膜,,,,,,,,,,,,,,,,,,,穿入-----形成內(nèi)涵體,病毒成分的合成,此過程稱為“隱蔽期”，主要為mRNA的轉(zhuǎn)錄、病毒多肽的轉(zhuǎn)譯和基因組的復制等根據(jù)病毒核酸及其轉(zhuǎn)錄和復制的方式不同，將動物病毒分為以下六個基本類型1．雙股DNA病毒

12、2．單股DNA病毒3．雙股RNA病毒 4．單股 RNA（正股）病毒5．單股 RNA（負股）病毒6．單股 RNA（正股反轉(zhuǎn)錄）病毒,病毒的裝配與釋放,新合成的病毒蛋白質(zhì)亞單位組成前衣殼，病毒核酸進入前衣殼而形成完整的病毒粒子。無囊膜的病毒由于細胞溶解而逸出胞外。有囊膜的病毒，在核膜、胞漿空泡膜和細胞膜上出芽時，獲得囊膜囊膜病毒出芽時，病毒糖蛋白進入細胞膜，使細胞獲得病毒抗原的特異性,天花病毒的裝配與成熟,Semliki

13、Forest Virus 釋放,HIV 釋放與成熟,Hockley et al. J Gen Virol 69:2455-2469,沒感染的,HIV 感染的 (at higher magnification),HIV感染的,,二、 病毒的營養(yǎng)需求,必須利用活的細胞為其提供生物合成所需的能量和材料。常以動物、雞胚、細胞培養(yǎng)方法增殖病毒培養(yǎng)細胞的營養(yǎng)液主要成分包括： 無機鹽離子、碳水化合物、

14、 氨基酸、維生素、 蛋白質(zhì)及抗生素等。,三、禽胚增殖病毒技術(shù),禽胚的選擇接種途徑與收獲 絨毛尿囊膜接種法 尿囊腔接種法 羊膜腔接種法 卵黃囊接種法其它接種方法：腦內(nèi)接種、胚體接種、靜脈接種,10-11天齡雞胚,影響禽胚增殖病毒的因素,種蛋質(zhì)量 SPF胚、母源抗體、抗生素殘留孵化技術(shù) 溫度、濕度、通風、翻蛋等接種技

15、術(shù)： 無菌操作、傷及胚體,,雞胚接種后的檢查與收獲病毒棄去接種24小時內(nèi)死亡的胚蛋，24小時后死亡的胚蛋隨時取出，放4～8℃冷凍4～24小時，以備收獲材料。收獲含病毒的尿囊液、羊水、絨毛尿囊膜、卵黃囊、胚體,,四、培養(yǎng)病毒的細胞類型及其培養(yǎng)方法,細胞類型1、原代細胞 (2-3代)2、二倍體細胞株 (有限性，10-50代)3、傳代細胞 (惡性轉(zhuǎn)化細胞系、轉(zhuǎn)化細胞系),細胞培養(yǎng)方

16、法,1、靜置培養(yǎng)2、轉(zhuǎn)動培養(yǎng)3、懸 浮培養(yǎng)4、微載體培養(yǎng)5、中空纖維細胞培養(yǎng)6、微囊化細胞培養(yǎng),組織培養(yǎng)細胞,上皮細胞,上皮樣細胞,纖維原細胞,上皮細胞------腺病毒,正常,感染初期,感染后期,上皮細胞(epithelial cells) –呼吸道合胞病毒( respiratory syncytial virus),感染前,感染后,纖維原細胞-------單純皰疹病毒,正常,感染初期,感染后期,纖維原細胞-----脊髓灰質(zhì)

17、炎病毒,正常,感染初期,感染后期,三、實驗室細胞培養(yǎng)技術(shù),培養(yǎng)細胞用器材及其處理一次性的使用方便酸堿處理、清潔、干燥、消毒,,細胞培養(yǎng)液和貯存液1、平衡鹽溶液(BSS)和磷酸緩沖鹽溶液(PBS)2、胰蛋白酶-EDTA溶液3．碳酸氫鈉溶液4．胰蛋白酶溶液5．水解乳蛋白溶液6．胰蛋白胨磷酸鹽肉湯（TPB）7．Eagle’s營養(yǎng)液8．199營養(yǎng)液9. RPMI－1640營養(yǎng)液10. 犢牛血清、抗生素,,細胞培養(yǎng)

18、的細胞制備1、雞胚成纖維細胞(CEF)10天齡雞胚→去頭、腳、翅、內(nèi)臟→剪碎→洗3次→加胰酶水浴消化→洗3次→加入生長液過濾→離心→加犢牛血清、營養(yǎng)液分裝培養(yǎng)瓶→24~48小時后成間層細胞,,2．傳代細胞的培養(yǎng)：次代細胞和傳代細胞系的培養(yǎng)方法基本相同。良好單層的細胞→用無鈣鎂的磷酸平衡鹽水洗兩次→胰酶消化→加生長液分裝(1：3~4),,細胞的保存單層的細胞培養(yǎng)→更換新的營養(yǎng)液→胰酶消化→收集細胞→細胞冷凍保護液→分裝干lml

19、安瓿→0.05％美藍溶液中，4℃30min →一50～一70℃ →液氮罐內(nèi)貯存數(shù)年細胞的復蘇：將安瓿自液氮罐取出后立即放入37～40℃溫水中，在lmin之內(nèi)使細胞融化→吸出細胞懸液→加入新的生長液，稀釋分裝培養(yǎng)瓶→貼壁后換液一次→至形成細胞單層。細胞的運輸：留少量生長液能覆蓋單層，防細胞干燥，防液體振蕩沖脫細胞。,,病毒的接種與檢查單層細胞培養(yǎng)→棄生長液→洗一次細胞面→接種待檢病料或病毒液→ 吸附30～60min →棄接

20、種液加入維持液→細胞病變→鑒定,,病毒的蝕（空）斑技術(shù)病毒接種于細胞上→覆蓋一層瓊脂→形成局限性病灶→蝕斑多用于病毒克隆化及病毒含量的滴定,細胞培養(yǎng)污染問題,細菌污染真菌污染支原體污染病毒污染來源血清的原蟲污染,五、以動物體增值病毒的技術(shù),用途病毒的致病力、致病機理免疫應答方面制造疫苗抗血清等,接種技術(shù)腦內(nèi)接種法皮內(nèi)接種法皮下接種法靜脈接種法腹腔接種法,六、工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)病毒的方法,1．多表面細胞培養(yǎng)

21、系統(tǒng)(多層玻璃板) 2．微載體細胞培養(yǎng)系統(tǒng) 3．氣升懸浮細胞培養(yǎng)系統(tǒng) 4．過濾培養(yǎng)5．大規(guī)模生產(chǎn)過程中的計算機自動控制系統(tǒng),第二章 第六節(jié) 滅活劑、保護劑與免疫佐劑,,一、 滅活劑,滅活滅活—指破壞微生物的生物活性、繁殖能力和致病性，但不影響其免疫原性。微生物滅活、血清滅活、毒素滅活…,滅活的主要方法,物理滅活： 加熱 超聲波裂解、 60Co照射等,,化學滅活：用于滅活微生物的

22、化學試劑或藥物稱為滅活劑。 甲醛、戊二醛 烷化劑(乙?；蚁﹣啺贰⒍蚁﹣啺?、縮水甘油醛)、 苯酚、 結(jié)晶紫、 β-丙酰內(nèi)酯,影響滅活作用的因素,滅活劑的特異性微生物種類與特性滅活劑濃度滅活溫度滅活時間酸堿度有機物的存在,新型滅活劑的作用,新型病毒滅活劑----辛酸鈉，用于血清制品的病毒滅活殼聚糖----可作為流感病毒滅活疫苗的新型佐劑,二、保護劑,指一類能防止生物活性物

23、質(zhì)在冷凍真空干燥時受到破壞的物質(zhì)。作用機制：防止失去結(jié)合水 阻止結(jié)合水形成結(jié)晶 降低膜內(nèi)外滲透壓差 提供復蘇和修復所需的營養(yǎng),保護劑(穩(wěn)定劑)的種類,1. 滲透劑(二甲基亞砜、甘油和蔗糖等)，能滲入生物活性物質(zhì)內(nèi)部，降低因冷凍而增加的滲透壓，防細胞內(nèi)脫水 。 2. 非滲透劑(聚乙烯吡咯烷酮“PVP”和蛋白質(zhì)等)，能防止活性物質(zhì)由外向內(nèi)滲漏溶質(zhì)。,三.凍干

24、保護劑的組成,營養(yǎng)液：脫脂乳、蛋白胨、氨基酸、和糖類等賦形劑：蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP、葡聚糖等 抗氧化劑：Vit.C、Vit.E和硫代硫酸鈉等,四、影響保護劑效能的因素,保護劑的種類保護劑組分濃度保護劑配制方法保護劑酸堿度,五、常用的凍干保護劑,脫脂牛奶(TACC配方)脫脂奶-谷氨酸鈉(日本配方)7.5%葡萄糖-血清(NCYC配方)環(huán)乙醇-血清噴霧干燥穩(wěn)定劑(NCTC和NCIB的配方)……,三、免疫佐劑,佐劑

25、（Adjuvant）或“免疫佐劑”　凡能非特異地通過物理或化學的方式與抗原結(jié)合而增強其特異免疫性的物質(zhì)。用于疾病預防、治療、免疫制備中1925 年法國免疫學家Ranmon 發(fā)現(xiàn)在疫苗中加入某些與之無關(guān)的物質(zhì)可以特異性地增強機體的免疫反應,佐劑的作用機理,對抗原的作用增加抗原的表面積和改變活性基團構(gòu)型增強T細胞和B細胞的協(xié)同作用使抗原緩慢降解和緩釋對機體的作用引起細胞浸潤，增強細胞免疫反應加速淋巴細胞的轉(zhuǎn)化為效應細

26、胞使膜和胞漿活性增加分泌輔助因子細胞功能改變，免疫細胞數(shù)量增加,完美佐劑的標準,無致癌性; 無毒性; 純度高; 有一定的吸附力; 在動物體內(nèi)能被降解、吸收; 不含與動物有交叉反應的抗原物質(zhì); 不誘發(fā)自身過敏反應; 穩(wěn)定,儲存1 年以上不分解、不變質(zhì),佐劑的類型,1、顆粒性佐劑鹽類佐劑油水乳劑佐劑蜂膠佐劑脂質(zhì)體佐劑免疫剌激復合物(ISCOM)佐劑其它：MF59佐劑、微囊化佐劑、硬脂酰酪氨酸佐劑、γ-菊粉等,佐

27、劑的類型,2、可溶性佐劑肽類： MDP 表面活性分子類： TDM核酸及其衍生物類： CpG DNA, CpG-ODN含硫復合物類： 左旋咪唑碳水化合物高分子類：多糖和DEAE-葡聚糖等細胞因子類： IL- γ-IFN脂質(zhì)分體類： 脂多糖，Vit.A\E其他： 蛋白毒素如CT、P

28、T、TT,常用佐劑,1、鋁鹽類佐劑 氫氧化鋁膠 明礬 磷酸三鈣,,氫氧化鋁成本低廉,使用方便、無毒,是胞外繁殖的細菌及寄生蟲抗原的良好免疫佐劑。主要的不足之處是鋁鹽佐劑僅能誘導、激發(fā)體液免疫。,油乳劑佐劑,弗氏佐劑、265 佐劑、白油Span 佐劑、MF259……,常用礦物油佐劑的缺點,①礦物油在組織中因不能代謝而長期存在，造成局部組織損傷；②有污染致癌性多環(huán)芳香烴化物的危險，限制了礦物油佐

29、劑只應用于實驗動物及一些獸用疫苗。,蜂膠（Propolis）佐劑,蜂膠是蜜蜂采自柳樹、楊樹、栗樹和其它植物幼芽分泌的樹脂，并混入蜜蜂上顎腺分泌物，以及蜂蠟、花粉及其它一些有機與無機物的一種天然物質(zhì)。,,蜂膠免疫性劑具有良好的免疫增強作用，它能增強巨噬細胞的吞噬能力，促進抗體的產(chǎn)生，提高機體的特異性和非特異性免疫力。質(zhì)量不穩(wěn)定蜂膠需95%乙醇溶解蜂膠佐劑注射部位形成腫塊,新型免疫佐劑,細胞因子類佐劑CpG DNA(胞嘧啶鳥嘌呤二

30、核苷酸 DNA)基因工程減毒素免疫刺激復合物（ISCOM）佐劑脂質(zhì)體(liposomes)佐劑MF59佐劑……,新型佐劑----細胞因子類佐劑,作為免疫佐劑，其佐劑活性不如常規(guī)佐劑作為免疫治療劑，預防治療某些病原感染通過基因重組，構(gòu)建新型基因工程疫苗這類細胞因子主要為IL-2、IL-1、IL-12、γ-干擾素。,CpG DNA(胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸),激活NK細胞和巨噬細胞刺激B細胞及產(chǎn)生Ig誘導分泌多種細胞因子誘

31、導抗抗體誘生的細胞凋亡安全、無副作用、可人工合成(CpG-ODN—寡聚脫氧核苷酸),基因工程減毒素,細菌細胞壁成分或毒素通過現(xiàn)代基因工程技術(shù)脫毒霍亂毒素(CT)大腸桿菌不耐熱毒素(LT)破傷風類毒素(TT),其他新型佐劑,1、免疫刺激復合物（ISCOM）佐劑ISCOM是由抗原+Quil A+膽固醇=1：1：1混合后自發(fā)共價結(jié)合而成的一種較高免疫活性的脂質(zhì)小泡。ISCOM現(xiàn)已廣泛應用于獸醫(yī)多種細菌、病毒和寄生蟲病的疫

32、苗。,,ISCOM快速、有效地將抗原遞呈給免疫系統(tǒng)免疫后迅速激活機體的細胞免疫應答和體液免疫應答經(jīng)口服或鼻腔接種獲得免疫, 且能達到在局部和全身黏膜表面誘導有效而特異的黏膜應答;重復低劑量口服ISCOM疫苗不會引起免疫耐受只有含疏水基團很多的抗原或免疫原才能與ISCOM形成復合物,2、脂質(zhì)體(liposomes)佐劑,人工合成的具有單層或單位膜樣結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)小囊，由一個或多個類似細胞單位的類脂雙分子包囊水相介質(zhì)所組成，具有

33、佐劑兼載體效應。一類以提高抗原輸送和遞呈為主要作用的佐劑與弗氏佐劑或鋁膠合用，效果更佳,,脂質(zhì)體膜對細胞膜具有很好的親和性,容易將包被在脂質(zhì)體上或內(nèi)部的抗原成分輸入到細胞內(nèi)近似于病毒與宿主細胞的作用過程，定向傳輸主要存在問題是穩(wěn)定性,,由N’,Ｎ’-二甲基乙二胺基氨甲?；懝檀?DC chol)制備成的正電荷脂質(zhì)體作為基因轉(zhuǎn)移的載體而被批準用于基因治療的臨床研究脂質(zhì)體佐劑多在粘膜疫苗和基因工程疫苗上應用,3、納米(N

34、anometer, NM)佐劑,是將抗原物質(zhì)或能編碼免疫原多肽的DNA或RNA包裹于納米粒子內(nèi)部或是吸附在納米粒子表面, 或與納米粒子結(jié)合納米乳劑是對黏膜無毒性的佐劑避免傳統(tǒng)疫苗的載體效應發(fā)生,提高生物利用度, 提高制劑的均勻性、分散性和吸收性,4、MF59佐劑,4.3%角鯊烷+0.5%吐溫-80+0.5%司班-80制成水包油型疫苗可刺激體液免疫，可激發(fā)細胞免疫取代氟氏佐劑。采用了可代謝和無毒的鯊烯作為油劑,以減輕炎

35、癥反應實驗效果并不穩(wěn)定,5、Quil A佐劑,QuilA 系從南美皂樹樹皮中篩選到的具有佐劑活性的成分。使外源性抗原刺激機體Th1免疫應答, 又能誘導CTL應答亞單位疫苗、細胞內(nèi)病原體疫苗及癌癥疫苗的理想佐劑引起溶血、局部組織壞死, 甚至全身不良反應或中毒,6、胞壁酰二肽(MDP)及其衍生物佐劑,從分枝桿菌細胞壁中分離到的具有活的最小結(jié)構(gòu)片段誘導機體產(chǎn)生細胞因子存在致熱原性,在動物體內(nèi)會引起賴特爾過敏綜合征,,注射局部

36、反應輕微, 極少化膿無抗原性和過敏原性,可反復注射無致癌作用分子量小, 對生物學降解作用有抵抗力, 可以口服。,（七）佐劑的應用關(guān)鍵,控制抗原-佐劑復合物的體積利用佐劑的靶向性優(yōu)化佐劑的選擇注重佐劑的聯(lián)合應用,（八）在DNA 疫苗上使用較有潛力的免疫佐劑,CpG-ODN脂質(zhì)體霍亂毒素(CT) 大腸桿菌熱不穩(wěn)定性腸毒素(LT) 細胞因子…….,（九）新佐劑的研發(fā),藥效、藥理、毒理學研究佐劑類型、聯(lián)用配方有效性

37、、安全性、選擇性、可控性有機結(jié)合,（十）中藥免疫佐劑,具有多效性、雙向調(diào)節(jié)性、不良反應少、毒副作用小和無依賴性等特點。存在成分復雜、作用機制不清、穩(wěn)定性差多糖、黃酮、皂苷等是主要的活性成分,能有效提高機體免疫力的中藥,滋補類藥物中的人參、枸杞、五味子、何首烏、黃芪、仙茅、肉桂等; 清熱解毒藥物中的金銀花、仙人掌、黃連、黃芩、柴胡、穿心蓮、大黃、板藍根等; 活血化瘀藥物中的紅花、三七、川芎及一些地衣類植物等方劑有:玉屏風散、

38、補中益氣湯、小柴胡湯、養(yǎng)真方、銀翹散、白虎湯等,中藥佐劑的作用機制,免疫調(diào)節(jié)( 細胞因子網(wǎng)絡的修飾) 、抗原遞呈( 抗原構(gòu)象的維持) 、細胞毒性T 細胞(CTL) 誘導、抗原靶向和儲存等,中藥佐劑的研究方向,傳統(tǒng)中藥制劑為研究對象以中藥有效部位( 群) 為研究對象以中藥有效單體為研究對象,第六節(jié) 生物制品的冷凍真空干燥技術(shù),,一、冷凍真空干燥(凍干)原理與特點,原理： 將生物活性物質(zhì)先行降溫凍結(jié)成固體，再在真

39、空和適度加溫(不超過40℃)條件下使固體水分子直接升華成水汽抽出，最后使生物活性物質(zhì)形成疏松、多孔樣固狀體。,一、冷凍真空干燥(凍干)原理與特點,特點： (1)保護熱敏物質(zhì)的活泩 (2)保護活性物質(zhì)的性狀 (3)保持活性物質(zhì)體積不變 (4)可以長期保存活性物質(zhì)凍干技術(shù)方泛用于：醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域,各種凍干機,,凍干機,,食品凍干機,二、凍干機組與凍干程序,凍干機組： 致

40、冷系統(tǒng) (冷凍機、凍干箱、冷凝器)真空系統(tǒng) (凍干箱、冷凝器、真空泵、真空管、真空閥) 加熱系統(tǒng)控制系統(tǒng),生物制品的凍干程序,液狀制品分裝 凍干箱空箱降溫 裝箱 預凍 抽真空 第一步加熱

41、 第二步加溫 結(jié)束凍干 放入干燥箱 加塞封蓋,課后復習題,生物制品生產(chǎn)原料主要來源是什么？制備生物制品用的強、弱菌(

42、毒)種應具備哪些基本標準？ 一般生物制品生產(chǎn)的主要流程生物制品生產(chǎn)中的分離與純化手段冷凍真空干燥的基本原理是什么？ 體外培養(yǎng)細胞的三種類型，并解釋概念。雞胚增殖病毒的接種方式有哪些培養(yǎng)增殖病毒的主要材料有哪些？動物病毒培養(yǎng)有哪些基本技術(shù)？ 簡述雞胚成纖維細胞制備的主要操作步驟。原代成纖維細胞培養(yǎng)需要準備的主要試劑包括哪些？雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)病毒的操作步驟是怎樣？,課后復習題2,在動物生物制品中最早和最普及使用的佐劑是