p16與c-myc基因表達產(chǎn)物在肝細胞癌及癌旁組織中的表達及臨床意義

1、p16p16與cmyccmyc基因表達基因表達產(chǎn)物在肝細胞癌及癌產(chǎn)物在肝細胞癌及癌旁組織中的表達及臨旁組織中的表達及臨床意義床意義中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志1999年第9卷第3期史憲杰李開宗竇科峰高志清張傳山胡沛臻馬福成目的：探討p16、cmyc蛋白與肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度的關(guān)系。方法：應用免疫組織化學法檢測了69例HCC和63例癌旁組織p16及cmyc蛋白的表達，并結(jié)合臨床資料進

2、行分析。結(jié)果：p16蛋白主要分布在胞漿，少數(shù)細胞核內(nèi)也可見陽性顯色。cmyc蛋白主要分布在胞核。p16蛋白在肝癌組織及癌旁組織中的陽性率分別為26.5%(1869)和92%(5863)，兩者比較差異顯著(P＜0.01)。69例HCC標本，Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級中p16蛋白的檢出率分別為52.6%(1019)，23.3%(730)，5%(120)，p16蛋白在高分化HCC中的表達率明顯高于低分化HCC組(P＜0.05)。cmyc蛋白在癌組織及癌

3、旁組織中的陽性率分別為85.5%(5969)鼠抗p16及cmyc單克隆抗體均購自美國SantaCruzbiotechnologyInc.DAKOEnVisionTMSystem兩步法免疫組織學染色試劑盒購自DAKO公司。1.3方法與步驟石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，3%H2O2甲醇封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性，室溫下10min，PBS振洗5min3，浸泡于10mmolL檸檬酸緩沖液中(pH6.0)，微波修復抗原10min，自然冷卻至室溫后蒸餾水洗滌

4、，PBS振洗5min3，10%正常山羊血清封閉非特異背景染色37℃30min，切片加鼠抗p16單克隆抗體(1：150)，鼠抗cmyc單克隆抗體(1：100)，4℃過夜，37℃復溫30min，PBS振洗5min3，切片加mouseenVisionTM37℃30min，PBS振洗5min3，DAB顯色，蘇木精襯染，乙醇梯度脫水，二甲苯透明樹脂封片觀察。1.4對照試驗陽性對照：用己知p16及cmyc陽性的切片重復染色；空白對照：用PBS代替第