葎草humulus.l花粉變應(yīng)原蛋白組分分析

1、大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文葎草（Humulus.L）花粉變應(yīng)原蛋白組分分析姓名：魯穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：魏慶宇20050601律草( H u m u l u s ．L ) 花粉變應(yīng)原蛋白組分分析碩士研究生：魯穎指導(dǎo)教師：魏慶宇 副教授專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：免疫學(xué)摘 要目的：萑草( H u m u l u s ．L ) 為被子植物門(mén)雙子葉植物綱桑科蓰草屬一年生纏繞草本植物，j 辜草花粉已成為中國(guó)夏秋季花粉癥致敏原中僅次于蒿屬和豚草花

2、粉的主要致敏原之一。本次課題專(zhuān)門(mén)針對(duì)遼沈地區(qū)萑草花粉變應(yīng)原進(jìn)行了研究，對(duì)獯草花粉變應(yīng)原進(jìn)行分離、提純、蛋白組分分析，篩選其主要蛋白。方法：以自然脫落法采集蓰草花粉，過(guò)篩后室溫下乙醚脫脂，按常規(guī)方法加入C o c a ’S 液制備萑草花粉變應(yīng)原浸液，透析后自然蒸發(fā)對(duì)捧草花粉變應(yīng)原進(jìn)行進(jìn)一步濃縮。將捧草花粉變應(yīng)原浸液與磷酸鹽／S D S 樣品緩沖液按1 ：1 沸水浴中加熱5 分鐘滅活蛋白酶，將標(biāo)準(zhǔn)蛋白及處理過(guò)的薇草花粉變應(yīng)原浸液加入事先制備

3、好的凝膠孔內(nèi)，經(jīng)十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳( S D S —P A G E ) 。指示劑溴酚藍(lán)距凝膠邊緣約5 u r n 時(shí)，終止電泳。將凝膠板剝離，固定1 小時(shí)，轉(zhuǎn)移至考馬斯亮藍(lán)染色液中染色1 0 小時(shí)后，脫色至凝膠背景褪色，蛋白區(qū)帶清晰。脫色后，測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)蛋白和樣品蛋白的遷移距離，利用已知公式計(jì)算出相對(duì)遷移率，并以每個(gè)蛋白標(biāo)準(zhǔn)的分子量對(duì)數(shù)對(duì)它的相對(duì)遷移率作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)量出未知蛋白的遷移率，即可求出律草花粉變應(yīng)原各蛋白組分

4、的相對(duì)分子量。結(jié)果：S D S —P A G E 電泳結(jié)果可見(jiàn)6 條明顯區(qū)帶，分子量分別為8 7 ，6 6 ，4 6 ．8 ，3 0 ，2 3 ，1 6 ．6 k D ，其中2 3 k D 的蛋白區(qū)帶顏色較深。結(jié)論：萑草花粉變應(yīng)原含6 種主要蛋白成份，分子量分別為8 7 ，6 6 ，4 6 ．8 ，3 0 ，2 3 ，1 6 ．6 k D ，其中2 3 k D 的蛋白區(qū)帶色深，提示含量較高。關(guān)鍵詞： 獯草花粉變應(yīng)原S D S —P A