魚腥草對lps誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響及機(jī)制

1、論文題目：魚腥堇盟L 墜透昱B 壘鯊2 §§：2 塑凰超性固王塞鯊笪顯墮叢拯劍答辯委員會主席： 王壓麴援答辯委員會成員： 睦塵豎麴攫點(diǎn)蟲撻麴攮論文答辯時間2 Q ! ! 生5 旦! ! 旦Ⅻ州Ⅸ{ 院碰±學(xué)位畦Z魚腥草對L P S 誘導(dǎo)R A W 2 6 4 ．7 細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響及機(jī)制摘要目的：觀察魚腥草洼射液預(yù)處理對脂多糖( L i p o p o l y s a c c h a r i d e

2、，L P S ) 誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 7 腫瘤壞死因子一o ( t u m o rn e c r o s i sf a e t o r a ，1 N F - a ) 和巨噬細(xì)咆炎癥蛋白( m a c r o p h a g e i n f l a m m a t o r y p r o t e i n - 2 ，M I P - 2 ) 表達(dá)的影響，并探討與核因子- K B p 6 5 ( N u c l e a r

3、 f a c t o r —l c Bp 6 5 - N F —K Bp 6 5 ) 的關(guān)系。方法：I 培養(yǎng)細(xì)胞：R A W 2 6 4 ．7 巨噬細(xì)胞在含1 0 ％胎牛血清、1 0 0 U ／m L 青、鏈霉紊的D M E M 培養(yǎng)基中。置于3 7 。C 、5 ％C 0 2 孵箱培養(yǎng)，細(xì)胞生長至8 0 ％- - 9 0 ％融合后進(jìn)行傳代。0 2 5 E 丑胰酶E D T A 消化細(xì)胞后，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為2 ×1 0 6 個，m

4、 l ，每瓶4 m L 接種于I O O m L 細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，取處于對數(shù)生眭期用于實(shí)驗。2 藥物濃度篩選：采用C C K 一8 法刪定不同濃度魚腥革和L P S 對巨噬細(xì)胞R A W 2 6 4 7 活性的影響，咀選擇合適濃度：咀檢測的吸光度( A b s o r b a n c e ，A ) 值大小作為細(xì)胞相對數(shù)量的比較。3 細(xì)胞分組：f 1 ) 空白對照組：僅加常規(guī)培養(yǎng)基：( 2 ) L P S 模型組：為l m g ／L L

5、 P S作用2 4 小時：( 3 ) 4 < N 濃度魚腥草預(yù)處理+ L P s 組：分別為l u l ，m L 、5 u l ／m L 、1 0 u l ／m L魚腥草頇處理細(xì)胞2 4 ／j 、時后，換含L P S I m g ／L 的D M E M 培養(yǎng)基孵育細(xì)胞。4 測細(xì)胞活力：凋摧細(xì)胞濃度為5 x 1 0 4 個，m 1 ．每7 L l o o p I ，均勻加入9 6 , } L 培養(yǎng)扳山，置5 ％C 0 23 7 。C

6、 孵箱培養(yǎng)2 4 h 。吸除舊培養(yǎng)液．設(shè)空白對照組、不同濃度魚腥草I u l ／m l 、5 u l ／m l 、1 0 u l ／m l 預(yù)處理扎P S ，每組平行做6 個復(fù)孔，放入相同孵箱培養(yǎng)2 4 4 ' 時后，每孑= L ) J n , x ．1 0 p L C C K - 8 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 。用W e l l s c a n M K 3 酶標(biāo)儀檢刪( 4 5 0 r i m 處) 備孔的吸光值，檢測細(xì)胞的活力。

7、5 ．觀察細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞懸液濃度) 5 J 2 x 1 0 5 個／m l ，加入2 4 孔培養(yǎng)板中t 每j L l m l t置3 7 “ C 、5 ％C 0 2 孵箱培養(yǎng)2 4 h 。設(shè)空白對照組、L P S 模型組、不同濃度魚腥草l u l ／m f 、5 u I h n l 、l O d ／m l 預(yù)處理十L P S ，培養(yǎng)2 4 h 后，棄上清液，用預(yù)冷舶P B S 液洗3 遍，用4 ％多聚甲醛P A 固定1 0 m i n

8、后，按照G i e m s a 試劑盒說明常規(guī)細(xì)胞染色，預(yù)冷的P B S 液洗3 遍后，倒置顯微鏡( 1 0 0 倍) 下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。6 采用酶聯(lián)免疫吸附( E L I S A ) 法測定備組R A W 2 6 47 細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子一Ⅱ( t u m o rn e c r o s i s f a c t o r - a ，T N F ．d ) 和巨噬細(xì)胞炎癥蛋白- 2 ( m a c r o p h a g ei n t 目