聲表面波傳感器及其在肺癌標志物與毒素快速檢測中的應用研究.pdf

1、聲表面波傳感器是微機電系統(tǒng)和微加工工藝發(fā)展下研制出的一種新型傳感器，主要包括瑞利波傳感器、水平剪切波傳感器和樂甫波傳感器等。其中樂甫波傳感器由于其能在液體環(huán)境下穩(wěn)定工作和高靈敏度的優(yōu)點，近年來成為了研究的熱點，并被逐漸應用于臨床醫(yī)學、環(huán)境、食品分析等領域。
　　本論文以樂甫型聲表面波傳感器為研究對象，結合了微加工技術、信號檢測技術以及生化檢測技術，構建了一種樂甫型聲表面波傳感器并用于肺癌標志物和毒素檢測。
　　本論文設計并研

2、制了一種高靈敏度的樂甫型聲表面波傳感器，并結合微流控芯片技術，搭建了多通道便攜式樂甫型聲表面波傳感器流動檢測和細胞檢測系統(tǒng)。本論文利用了抗原抗體特異性結合的免疫檢測技術，實現(xiàn)了對呼出氣體冷凝物中肺癌生物標志物蛋白和海洋生物毒素中貝類毒素的檢測分析。另外，還使用了細胞作為傳感敏感元件構建出一種新型細胞傳感器，并用于貝類毒素的檢測。隨著樂甫型聲表面波傳感器的發(fā)展，該檢測技術及其便攜式檢測系統(tǒng)將會為生化檢測提供快速高靈敏的分析測試平臺。

3、>　　本論文的主要創(chuàng)新性研究工作在于:
　　1.提出了樂甫型聲表面波器件結合微流控芯片的傳感器設計方法，設計了檢測聲表面波傳感器幅值和相位信號的電路檢測系統(tǒng)，保證了傳感器的高通量檢測精度。
　　基于微加工工藝，設計并制造了ST切石英為壓電基底、SiO2為波導層、Au為敏感層的樂甫型聲表面波傳感器芯片，結合根據傳感器參數設計了特定的微流控芯片，在保證傳感器傳輸特性的同時，提高了樂甫型聲表面波傳感器用于生化檢測的可靠性。針對樂甫

4、型聲表面波傳感器，開發(fā)了擁有自動進樣、檢測電路和移動端軟件的多路檢測系統(tǒng)，實現(xiàn)了對傳感器的自動化高通量檢測。
　　2.提出了結合納米金的質量信號增強方法的樂甫型聲表面波免疫傳感器，成功實現(xiàn)了對呼出氣體冷凝物中肺癌生物標志物癌胚抗原(CEA)的高靈敏檢測。
　　為了實現(xiàn)傳感器對CEA的特異性檢測，首先在傳感器表面固定蛋白A，CEA的包被抗體可以利用蛋白A導向性地固定在傳感器的敏感區(qū)域，之后利用包被抗體捕獲樣本溶液中的CEA。此

5、外，為了提高傳感器質量靈敏度，利用了納米金顆粒對檢測抗體進行標記，并在傳感器表面構建“三明治”結構免疫反應。最后再通過金染色液，溶液中的金離子會被納米金催化析出并沉積在納米金表面，傳感器質量信號被放大。該傳感器用于呼出氣體冷凝物中CEA檢測的檢出限為0.967 ng/mL，比肺癌初篩的診斷閾值要低，表明該方法可以有效用于臨床肺癌的篩查。
　　3.提出了基于免疫競爭法的樂甫型聲表面波免疫傳感器，實現(xiàn)了對大田軟海綿酸(OA)的特異性檢

6、測。
　　本研究采用競爭免疫分析技術來檢測小分子的OA含量。檢測時同樣使用了納米金顆粒和金染色液技術用于放大傳感器的檢測信號，增加檢測靈敏度。同時，該傳感器在10-150 ng/mL濃度范圍內具有很好的線性，檢出限為5.45ng/mL。并且通過檢測實際加標樣本以及與ELISA方法的對比實驗，說明該方法具有很好的特異性和準確性，可以有效地用于貝肉實際樣品中OA毒素的檢測。
　　4.提出了基于HepG2肝癌細胞的樂甫型聲表面波傳

7、感器，并實現(xiàn)了對大田軟海綿酸(OA)的便捷檢測。
　　本研究設計了一種基于HepG2的細胞傳感器，并將其用于OA的檢測。對毒素檢測時的細胞培養(yǎng)密度進行了優(yōu)化，最佳細胞密度為10000個/孔。當毒素濃度在10-100 ng/mL時，樂甫型聲表面?zhèn)鞲衅魉鶞y得的插入損耗變化值與OA濃度有良好的線性關系，其相關系數為0.9834，其檢出限為10.91 ng/mL。而且對其他毒素進行了測試，結果說明了該檢測方法具有良好的特異性和重復性。該檢