分子光譜法測(cè)定核酸和藥物的新方法研究.pdf

1、分子光譜法是利用測(cè)定物質(zhì)光譜特征(反射、透射、吸收或發(fā)射、散射輻射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度)而建立的定性定量和結(jié)構(gòu)分析的方法。它是測(cè)定和鑒別分子結(jié)構(gòu)的重要研究手段，曾是分子軌道理論發(fā)展和實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。分子光譜根據(jù)吸收電磁波的范圍不同，可分為遠(yuǎn)紅外光譜、紅外光譜及紫外、可見光譜等。根據(jù)電磁波的發(fā)射方式可為分子熒光、磷光和散射光譜等。本文研究和發(fā)展了用分子光譜法測(cè)定長(zhǎng)春地辛、巰嘌呤及核酸的新體系和新方法。重點(diǎn)研究測(cè)定對(duì)象與金屬離子或鹵代熒光素染料之間相互

2、作用的吸收光譜、熒光光譜和共振瑞利散射光譜的特征，適宜的反應(yīng)條件和主要影響因素及其分析應(yīng)用，并初步探討了RRS光譜變化的反應(yīng)機(jī)理。
　　 本文在重慶市教委科技項(xiàng)目(KJ081306)資助下，研究分子光譜分析技術(shù)的某些新的分析應(yīng)用：1、研究利用吸收、熒光、共振散射光譜技術(shù)測(cè)定長(zhǎng)春地辛的新方法，以及長(zhǎng)春地辛與磷鎢雜多酸的相互作用，比較方法的靈敏度，并拓展其分析應(yīng)用領(lǐng)域。2、研究金屬離子與巰嘌呤的相互作用以及巰嘌呤的金屬螯合物與核酸的

3、反應(yīng)，并發(fā)展了用RRS法測(cè)定巰嘌呤和核酸的新方法。
　　 1.分子光譜法研究長(zhǎng)春地辛與鹵代熒光素染料的相互作用及其分析應(yīng)用。
　　 1.1.長(zhǎng)春地辛與赤鮮紅的吸收、熒光和共振瑞利散射光譜研究及其分析應(yīng)用在pH 2.7的BR緩沖溶液中，長(zhǎng)春地辛與赤鮮紅相互作用形成離子締合物，導(dǎo)致其吸收光譜的變化，熒光光譜猝滅，以及共振瑞利散射(RRS)光譜顯著增強(qiáng)。其吸收峰位于520 nm，熒光峰的最大激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別位于523 n

4、m和551nm，最大RRS峰位于325 nm；且吸光度增加、熒光光譜猝滅程度以及散射光譜增強(qiáng)程度均與長(zhǎng)春地辛濃度增加呈線性關(guān)系，其線性范圍分別為：0.8～4.0μg·mL-1、0.2～3.0 μg·mL-1、0.08-2.0 μg·mL-1、檢出限分別為：0.120 μg·mL-1、0.072 μg·mL-1、0.019G·mL-1。據(jù)此可建立分析測(cè)定痕量長(zhǎng)春地辛的新方法，將共振瑞利散射法用于尿樣中長(zhǎng)春地辛含量的快速測(cè)定，結(jié)果滿意。文中

5、對(duì)反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了初步探討。
　　 1.2.虎紅褪色分光光度法測(cè)定長(zhǎng)春地辛在pH 4.0的BR緩沖溶液中，長(zhǎng)春地辛(VDS)與虎紅染料(RB)的相互作用導(dǎo)致吸收光譜的變化，在波長(zhǎng)546 nm處產(chǎn)生明顯的褪色反應(yīng)。褪色反應(yīng)在0.5～6.0μg ml-1濃度范圍內(nèi)遵循比爾定律，檢出限可達(dá)0.29 μg·mL-1。本文主要研究了褪色反應(yīng)的吸收光譜特征、適宜的反應(yīng)條件及影響因素，考察了共存物質(zhì)的影響，表明方法有較好的選擇性。方法可用于尿樣

6、中長(zhǎng)春地辛的定量測(cè)定。
　　 2.長(zhǎng)春地辛與磷鎢雜多酸的共振散射光譜和共振非線性散射光譜研究及其分析應(yīng)用在0.2mol/L的鹽酸介質(zhì)中，長(zhǎng)春地辛(VDS)與磷鎢雜多酸(PW)生成離子締合物，導(dǎo)致其共振瑞利散射(RRS)、以及二級(jí)散射(SOS)和倍頻散射(FDS)非線性散射的光譜顯著增強(qiáng)。 其最大RRS，SOS和FDS波長(zhǎng)分別位于308 nm，564nm和390 nm處。在一定范圍內(nèi)其散射光譜增強(qiáng)程度(△I)與長(zhǎng)春地辛的濃度呈線性

7、關(guān)系，方法對(duì)于VDS的線性范圍和檢出限分別為0.08-2.0 μg/mL和7.0 ng/mL(RRS法)、0.08-2.5 μg/mL和14 ng/mL(SOS法)、0.08-2.5 μg/mL和11 ng/mL(FDS法)。其中以測(cè)定VDS靈敏度最高的RRS法為例，研究了RRS法的適宜反應(yīng)條件和影響因素，考察一些共存物質(zhì)的影響，表明方法有良好的選擇性。據(jù)此建立了一種靈敏、簡(jiǎn)便、快速測(cè)定VDS的新方法，并用于人血清、尿樣中VDS的定量測(cè)

8、定。
　　 3.鈀(Ⅱ)離子與巰嘌呤相互作用的共振瑞利散射光譜及其分析應(yīng)用在pH 4.8左右的BR緩沖溶液中，金屬離子pd2+與巰嘌呤反應(yīng)形成穩(wěn)定配合物，其物質(zhì)的量之比為1：1，同時(shí)引起共振瑞利散射(RRS)的顯著增強(qiáng)，并出現(xiàn)新的RRS光譜。pd2+與藥物的反應(yīng)產(chǎn)物具有較寬的散射峰，選取400 nm處為測(cè)定波長(zhǎng)。在一定范圍內(nèi)散射增強(qiáng)(△I)與藥物的濃度成正比，線性范圍分別是0.05～3.6 μg·mL-1。方法具有較高的靈敏度，

9、檢出限(3σ)分別為17.0 ng·mL-1。據(jù)此建立的分析方法有較好的選擇性，可用于血清、尿樣中巰嘌呤的測(cè)定，能獲得較滿意的結(jié)果。
　　 4.銅(Ⅱ)-巰嘌呤與核酸體系的RRS光譜研究在pH 4.6-4.9的B-R緩沖溶液中，巰嘌呤能與銅(Ⅱ)形成螯合物，此時(shí)將引起共振瑞利散射(RRS)的顯著增強(qiáng)，并出現(xiàn)新的RRS光譜，最大散射波長(zhǎng)在453nm附近。加入鯡魚精DNA(hsDNA)、鮭魚精DNA(sDNA)、小牛胸腺DNA(ct