黃芩苷鍵合硅膠色譜固定相的制備、表征及應(yīng)用.pdf

1、中草藥有效成分含天然獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，用作色譜分離材料具有作用位點(diǎn)豐富、色譜藥物雙功能等特點(diǎn)，在天然藥物分析、手性分離領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。新型中草藥有效成分鍵合色譜分離材料的研究和開發(fā)對中藥現(xiàn)代化具有重要意義，為深層次利用我國中草藥藥用成分開辟了新途徑，它是色譜學(xué)與相關(guān)應(yīng)用科學(xué)交叉的前沿研究課題，顯示出重要的學(xué)術(shù)價值。此外，該分離材料在中藥活性成分富集純化中同樣有較高的應(yīng)用價值。本學(xué)位論文制備了一種黃芩苷鍵合硅膠固定相，表征和評價了新固定

2、相的高效液相色譜性能，較系統(tǒng)地探討了相關(guān)色譜保留機(jī)理，并將該鍵合硅膠作為新型分離材料用于黃酮類化合物的分離富集。主要研究內(nèi)容如下： 1．對近年來高效液相色譜鍵合硅膠固定相和中草藥有效成分的提取純化方法進(jìn)行了綜述，分析總結(jié)了固定相制備表征、分類及各種固定相的應(yīng)用、中草藥活性成分的傳統(tǒng)分離提取方法和現(xiàn)代分離提取技術(shù)，展望了植物活性成分在色譜分析和中藥有效成分提純中的應(yīng)用前景，并以此作為本論文的選題依據(jù)和研究工作的出發(fā)點(diǎn)。 2

3、．采用固液相表面連續(xù)反應(yīng)法，以γ-氨丙基三乙氧基硅烷(TM550)為偶聯(lián)劑，制備了一種新型天然中草藥藥用成分鍵合固定相——黃芩苷鍵合硅膠固定相(BBSP)。首先制備含氨基的偶聯(lián)劑硅膠，然后將黃芩苷酰氯化，最后通過酰胺間隔臂將黃芩苷鍵合到硅膠表面。新固定相的外部裹土了黃酮苷元疏水層，增加了鍵合層的化學(xué)穩(wěn)定性。采用紅外光譜、質(zhì)譜分析、元素分析、熱重分析和化學(xué)分析等手段表征了新固定相的結(jié)構(gòu)，并對鍵合反應(yīng)的制備路線和反應(yīng)條件進(jìn)行了一定的優(yōu)化。結(jié)

4、果表明，黃芩苷配體已成功鍵合到硅膠基質(zhì)上，測定BBSP表面黃芩苷的鍵合量為0.11 mmol/g，比商品ODS鍵合量低，顯然配體的位置效應(yīng)有較大的影響。不同批次鍵合相的鍵合量相近，說明該鍵合反應(yīng)路線簡便易行。 3．采用勻漿法恒壓填裝色譜柱，首先測定柱效和對酸性流動相的穩(wěn)定性，然后以苯同系物探針及借鑒Kimata等提出的簡便方法評價黃芩苷鍵合相(BBSP)的基本色譜性能，包括疏水性能、氫鍵能力、立體選擇性和離子交換能力等。然后以多

5、環(huán)芳烴、含氮化合物、位置異構(gòu)體、酚類化合物、核苷和堿基、黃酮等化合物為溶質(zhì)探針，并與傳統(tǒng)的ODS對照研究，進(jìn)一步評價新固定相對酸性、堿性和中性化合物等不同類型溶質(zhì)的分離能力，分離對象涵蓋不同結(jié)構(gòu)、不同極性和不同電離性質(zhì)的探針，它們的色譜行為能較系統(tǒng)地揭示新固定相的色譜分離機(jī)理，為新固定相的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。結(jié)果表明，該固定相具有類似ODS的良好反相色譜性能，除疏水作用外，還能為溶質(zhì)提供較強(qiáng)的氫鍵、偶極、π-π共軛、n-π超共軛、離子

6、交換等多種作用位點(diǎn)，在電荷轉(zhuǎn)移中起電子受體作用。與ODS相比，由于包埋了極性的酰胺官能團(tuán)，屬于靜電屏蔽固定相，而且內(nèi)層為親水的葡萄糖基，因此對堿性物質(zhì)有較好的分離。此外，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新固定相對黃酮類化合物有強(qiáng)的選擇性保留，預(yù)示其在分離富集黃酮類化合物中有應(yīng)用價值。 4．將黃芩苷鍵合到常用的無定形硅膠載體上，制備黃芩苷鍵合硅膠分離富集材料(BBS)，用于中藥有效成分的富集和提取。通過紅外、元素分析、熱重分析和化學(xué)檢識的方法對BBS進(jìn)行

7、了結(jié)構(gòu)表征和鍵合量的測定。考察了靜態(tài)下BBS在溶液中對黃芩苷的吸附作用，表明硅膠表面的配體與溶液中的溶質(zhì)間存在相似相溶作用，這為從中草藥復(fù)雜體系快速富集有效成分提供了新途徑。為了研究BBS的分離富集性能，本文首先考察該材料對黃芩苷本身的富集作用，考察了不同實(shí)驗(yàn)條件對富集效果的影響，初步探索了黃芩苷的吸附和解吸條件。實(shí)驗(yàn)證明，雖然BBS鍵合量較低，但該材料對黃芩苷有明顯的吸附作用，吸附容量可達(dá)到214．26mg/g。 5．將黃芩苷

8、鍵合硅膠(BBS)作為分離富集材料，用于對黃芩中總黃酮的富集純化。采用HPLC-DAD-ESI-MS初步研究了黃芩提取液的主要成分，以顯色可見分光光度法為手段，研究了BBS對黃芩總黃酮的純化作用，考察了影響因素，并進(jìn)行了靜態(tài)吸附一解吸和動態(tài)吸附．解吸實(shí)驗(yàn)；以HPLC為作為輔助手段，獲取吸附前后各組分濃度變化的詳細(xì)信息。結(jié)果表明，BBS對黃芩提取液中的黃酮類化合物具有較好的選擇性作用，在所用實(shí)驗(yàn)條件下靜態(tài)飽和吸附量為81.96mg/g，對