擬南芥黃烷酮-3-羥化酶調(diào)控非生物脅迫抗性機理研究.pdf

1、植物在生長發(fā)育過程中會面臨各種環(huán)境脅迫，如干旱、鹽害、高溫、病原菌侵染和機械損傷等。雖然環(huán)境脅迫種類多樣，植物應答不同逆境的機理存在差異，但各種脅迫均能破壞植物細胞內(nèi)的氧化還原平衡，造成活性氧的積累。
　　通過在培養(yǎng)基中添加甲基紫精(MV)及濃度梯度實驗，最終選擇0.1μM MV作為篩選擬南芥氧化脅迫響應突變體的條件。經(jīng)過高通量篩選，在EMS（甲基磺酸乙酯）誘變M2代植株中發(fā)現(xiàn)了多株突變體，選擇其中的一株進行深入分析。該突變體不僅

2、對MV敏感，而且種皮顏色明顯變淺。通過圖位克隆發(fā)現(xiàn)突變發(fā)生在At3g51240，為TT6（Transparent Testa6）的等位基因，將該突變體命名為tt6-5?；パa及雜交實驗均證明了圖位克隆結(jié)果的可靠性。
　　通過檢測突變體對各種非生物脅迫的抗性，結(jié)果表明突變體對氧化脅迫、鹽脅迫和ABA均有響應。氧化脅迫及鹽脅迫條件下，tt6-5突變體的萌發(fā)和生長均受到明顯抑制;當用ABA進行處理時，突變體的萌發(fā)快于野生型，但是生長卻弱于

3、野生型?；パa株系能夠恢復突變體的各種表型，而TT6超表達株系發(fā)生了共抑制現(xiàn)象，呈現(xiàn)與突變體類似的表型。
　　表達模式分析表明，TT6在幼苗的各個組織中均有表達，而在成苗中主要在莖生葉與花中表達，蓮座葉中表達量較低，在側(cè)根中有少量表達。亞細胞定位結(jié)果表明TT6主要定位于細胞核與細胞膜中。
　　類黃酮作為次級代謝產(chǎn)物參與了很多細胞進程，如抗氧化、影響植物生長發(fā)育以及響應生物和非生物脅迫。F3H（黃烷酮-3-羥化酶）催化類黃酮合成