DREB2B基因和RD20基因在露地菊遺傳轉化的研究.pdf

1、干旱是植物生長過程中遇到的一種非生物脅迫，在受到干旱脅迫時，轉錄因子就會調控某些與逆境或抗旱相關的基因，通過一系列的轉錄、翻譯產生對細胞起重要保護作用的蛋白質等。RD20基因和DREB2B基因是應答干旱脅迫時重要的調控基因，在植物應答干旱脅迫方面扮演著重要的角色，可以激活許多逆境誘導基因的表達，增強植物對干旱逆境的忍耐力。磷酸甘露糖異構酶基因（PMI）是生物安全標記基因，無抗生素或除草劑抗性，對于轉基因的植株無毒害作用。本研究采用磷酸甘

2、露糖異構酶基因PMI為篩選標記基因，在已建立露地菊‘火焰’離體再生體系的基礎上將津田蕪菁RD20基因和擬南芥誘導轉錄因子DREB2B基因分別轉入菊花中，并采用生物基因磷酸甘露糖異構酶基因PMI為篩選標記基因，為實現具有安全標記的抗旱性狀得到改良的菊花品種奠定基礎。
　　研究結果如下:
　　(1)克隆了津田蕪菁RD20和擬南芥DREB2B基因。RD20基因cDNA序列全長為720bp，編碼239個氨基酸的成熟多肽。RD20的分

3、子量為26.9kD;等電點(PI)為5.10。DREB2B基因全長1434bp，開放閱讀框993個堿基，5'-UTR和3'-UTR分別為228bp和213bp，編碼330個氨基酸的成熟多肽。
　　(2)構建遺傳轉化載體:利用Gateway技術構建pCAMBIA1301-PMI-RD20和pCAMBIA1301-PMI-DREB2B植物表達載體，經PCR和酶切驗證后，將構建成功的植物表達載體電轉化農桿菌EHA105，之后通過PCR驗

4、證表明pCAMBIA1301-PMI-RD20和pCAMBIA1301-PMI-DREB2B植物表達載體成功轉入農桿菌EHA105中。
　　(3) RD20基因和DREB2B基因露地菊‘火焰’的遺傳轉化:對植株外植體消毒處理及體外培養(yǎng)，建立露地菊‘火焰’莖段外植體的無菌再生體系，用目的基因的農桿菌菌液侵染葉片，并以NAA與6-BA作為生長激素，建立了葉片外植體再生體系。將葉片上生成的不定芽轉入1/2 MS生根篩選培養(yǎng)基中繼續(xù)篩選，