人類Smad7的N端結構域(NTD)蛋白質(zhì)的折疊性質(zhì)研究.pdf

1、Smad7是一種重要的抑制型Smad蛋白，它主要通過競爭受體調(diào)控型Smad與細胞膜上I型TGF-β受體之間的結合，來調(diào)節(jié)TGF-β受體的泛素化和降解，對TGF-β信號通路起負調(diào)節(jié)作用。Smad7的N端結構域(NTD)在介導Smad7與E3泛素連接酶Smurf2和E2泛素結合酶UbcH7的相互作用過程中起關鍵作用，但是我們對它的生物化學和結構生物學特性知之甚少。
　　本論文首先采用生物信息學方法對人類Smad7氨基酸序列的折疊傾向性

2、進行分析，并且結合二級結構預測和多物種間抑制型 Smad序列對比得到預測的Smad7-NTD蛋白的性質(zhì)特征。然后我們構建一系列刪除不同長度N端序列和中間預測Loop序列的重組蛋白，對這些蛋白進行生物化學特性分析。結果顯示：Smad7的N端前20個左右的氨基酸影響Smad7-NTD蛋白的可溶性，它的刪除會造成蛋白質(zhì)不溶或聚集，因此推測這些氨基酸殘基在蛋白質(zhì)折疊中有非常重要的作用。同時由生物信息和生物化學實驗的結果可以看出，Smad7-NT

3、D的N端存在一個不參與折疊的無規(guī)Loop結構，這個Loop的存在導致Smad7-NTD蛋白易降解，而刪除這段Loop可以提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，使蛋白更適用于后期結晶實驗的研究。
　　同時本論文對另一種抑制型Smad蛋白Smad6進行了生物信息學分析，發(fā)現(xiàn)其結構預測與Smad7相似，但是對其蛋白質(zhì)的性質(zhì)還有待進一步研究。同時也對序列與其他R-Smad高度同源，但是功能卻不一樣的Smad2-MH1結構域進行了純化與初步結晶研究，表達了刪