簡介：本文主要從以下幾個部分展開論述第一部分眼咽肌病綜合癥患者的臨床特點分析本研究選取19952013年間于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院和北京大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的18個眼咽肌病綜合癥家系。所有先證者均行肌肉組織冰凍病理檢查及PABPN1基因篩查。根據(jù)PABPN1基因篩查結(jié)果，明確13個家系共34例患者為OPMD，5個家系共21例患者經(jīng)基因篩查未發(fā)現(xiàn)PABPN1突變，診斷為OPDM。OPMD組患者平均起病年齡為472±112歲（2767歲）。最常見的首發(fā)癥狀為吞咽困難，占53％1834，平均起病年齡為448±107歲其次為眼瞼下垂，占26％934，平均起病年齡為578±77歲。以吞咽困難為首發(fā)癥狀的患者較以眼瞼下垂首發(fā)的患者起病早P00036。截止到最后一次隨訪，入組患者平均病程為155±126年（153年），79％2734的患者出現(xiàn)眼瞼下垂，由此導(dǎo)致的視野受損成為本組患者中最大的困擾88％3034出現(xiàn)吞咽困難53％1834出現(xiàn)眼外肌麻痹41％1434出現(xiàn)肢體無力，皆以近端為主。同一家系內(nèi)部在首發(fā)癥狀及受累肌肉分布特點方面有高度的一致性。OPDM組患者平均起病年齡為264±587歲（2239歲）。本組患者中，最常見的首發(fā)癥狀是四肢肌無力，占38％821。截止到最后一次隨訪，入組患者平均病程為156±899年（134年），95％2021的患者出現(xiàn)眼瞼下垂和眼外肌麻痹52％1121出現(xiàn)吞咽困難，4例患者后期僅能進食半流質(zhì)57％1221出現(xiàn)肢體無力，皆首先累及肢體遠端，其中5例患者在起病12～15年后喪失獨立行走能力，需依賴輪椅。以四肢肌無力首發(fā)的家系普遍進展較快，2例患者在起病后17年（40歲）由于OPDM相關(guān)的吸入性肺炎及營養(yǎng)不良死亡。同一家系內(nèi)部在起病年齡、首發(fā)癥狀及進展速度上具有一致性。第二部分眼咽肌病綜合癥患者的肌肉病理特點分析18個家系的先證者均行肌肉組織冰凍病理檢查。肌肉標(biāo)本常規(guī)行組織學(xué)、酶組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色，包括蘇木素伊紅HE、改良GOMI三色MGT、高碘酸SCHIFF反應(yīng)PAS、油紅“O”脂肪染色O、還原型輔酶Ⅰ四氮唑還原酶NADHTR、琥珀酸脫氫酶SDH、細胞色素C氧化酶COX、三磷酸腺苷酶ATPASE（PH43，46，104和106）、DYSTROPHIN蛋白（C端，N端，ROD）、DYSFERLIN蛋白、（Α，Β，Γ，Δ）SARCOGLYCAN蛋白和CAVEOLIN3蛋白染色。其中部分先證者（7例OPMD患者及3例OPDM患者）接受電鏡檢查。本研究對照皆取自因肌無力而行肌肉活檢且病理結(jié)果為正常的肌肉標(biāo)本。OPMD及OPDM肌肉標(biāo)本在光鏡下病理改變相似，都表現(xiàn)為慢性肌源性改變伴肌纖維內(nèi)鑲邊空泡形成。OPMD中鑲邊空泡出現(xiàn)頻率平均為11±09％OPDM中平均為42±21％，較OPMD更為常見（P00159）。此外，OPDM肌肉損害較OPMD顯著，部分標(biāo)本可見呈小群分布的萎縮纖維，壞死伴吞噬，肌內(nèi)膜及間質(zhì)明顯增生。免疫組化染色未見異常。7例OPMD肌肉標(biāo)本行電鏡檢查，其中5例肌細胞核內(nèi)可見直徑約為85NM的管狀細絲樣包涵體。3例OPDM肌肉標(biāo)本電鏡下未發(fā)現(xiàn)肌核或肌漿內(nèi)管絲樣包涵體。第三部分眼咽型肌營養(yǎng)不良的分子生物學(xué)特點分析13個OPMD家系均經(jīng)PABPN1基因突變分析確診，先證者的DNA自活檢肌肉組織標(biāo)本中提取，家系成員DNA自外周血提取。本研究人群中共發(fā)現(xiàn)7種基因型，其中10個家系為單純GCG異常擴增，另3個家系伴有GCA的插入。最常見的基因型為GCG9GCA3GCG1，占46％613。家系1中先證者為復(fù)合雜合突變GCG6GCA1GCA3GCG1GCG6GCA1GCG1GCA3GCG1其姐攜帶1個正常等位基因，另一等位基因為GCG6GCA1GCG1GCA3GCG1其弟無臨床癥狀，但攜帶GCG6GCA1GCA3GCG1多態(tài)，該多態(tài)以往未見報告。結(jié)合表型，單純GCG異常擴增與伴有GCA插入的家系在臨床表現(xiàn)上無明顯差異。起病年齡及表型嚴重程度與GCN擴增次數(shù)無明顯相關(guān)。家系1中，先證者發(fā)病早期即出現(xiàn)眼、咽及肢體肌肉的全面受累，而其姐僅有吞咽困難，提示GCG6GCA1GCA3GCG1多態(tài)對表型可能具有調(diào)控作用。第四部分眼咽型遠端肌病致病基因的探索外顯子序列雖然僅占基因組序列的1％，但卻包含了編碼和調(diào)控蛋白質(zhì)合成的主要信息。在符合孟德爾遺傳模型的疾病中，85％以上的突變位點都位于外顯子區(qū)域。目前，利用全外顯子組測序技術(shù)WHOLEEXOMESEQUENCING，WES已成功定位了超過100種先前未知的疾病致病基因，包括罕見疾病、復(fù)雜疾病、腫瘤等。OPDM的致病基因至今不明且相關(guān)研究甚少，缺乏較大家系且報道寥寥是其重要限制因素。而WES較全基因組測序及家系連鎖分析的突出優(yōu)勢則在于，其可利用小家系，甚至散發(fā)病例完成致病基因的定位工作。故本研究擬利用WES探索OPDM的致病基因。本研究選取家系2中2例患者Ⅲ7，Ⅲ9及1例正常人（Ⅲ9之父），自外周血提取全基因組DNA行WES。按照顯性遺傳模型（不完全外顯）進行數(shù)據(jù)分析。家系2中其他成員及家系4用來驗證可能的候選基因。3例送檢者平均檢出105641個基因變異位點，包括非同義突變、剪切位點變異，插入及缺失突變。經(jīng)數(shù)據(jù)分析及功能預(yù)測后的篩選，得到52個非同義突變及3個缺失突變。然而經(jīng)SANGER測序驗證，未得到與疾病表型共分離的基因變異位點。結(jié)論1OPMD和OPDM為兩種獨立的疾病實體。吞咽困難是我國OPMD患者常見的首發(fā)癥狀，以吞咽困難為首發(fā)癥狀的患者較以眼瞼下垂首發(fā)的患者起病早（P00036）。OPDM患者中以肢體無力首發(fā)或可提示預(yù)后不良。在兩種疾病中，同一家系內(nèi)部的臨床表型都具有家族一致性，提示除致病基因外的其他遺傳背景可能參與調(diào)控OPMD及OPDM的表型。2我國OPDM患者光鏡下鑲邊空泡較OPMD更為常見P00159。3我國OPMD患者可見PABPN1基因單純GCG異常擴增，亦可有GCA插入突變，同時存在GCN11多態(tài)。13個家系檢測到7種PABPN1基因突變類型，提示中國人群中OPMD患者并非來自共同祖先。GCG6GCA1GCA3GCG1為我們首次報道，該多態(tài)可能參與調(diào)控疾病表型。4本研究利用WES探索OPDM致病基因，未能得到與疾病表型共分離的基因突變。WES存在漏檢可能，另推測OPDM致病基因或可位于非編碼序列亦可能為短串聯(lián)重復(fù)序列及拷貝數(shù)變異。

簡介：目的采用錐形束CT影像資料，測量高角不同矢狀骨面型不同性別年輕成人下頜體鄰牙間截面的高度、截面上不同位點唇（頰）舌側(cè)骨質(zhì)寬度及皮質(zhì)骨厚度，分析其變化規(guī)律，為臨床工作提供參考。方法從2011年6月至2014年10月就診于南昌大學(xué)附屬口腔醫(yī)院，并拍攝CBCT影像的年齡18～30歲之間的年輕成人患者中，按照MEGO（L）SN角377°選取高角病例73例。按照ANB角的大小將所有患者分為骨性Ⅰ類、Ⅱ類、Ⅲ類共三組（ANB＞47°為骨性Ⅱ類；07°≤ANB≤47°為骨性Ⅰ類；ANB＜07°為骨性Ⅲ類），其中I類組男12人，女15人；II類組男10人，女15人；III類組男10人，女11人。按照統(tǒng)一標(biāo)準拍攝CBCT影像，所獲得CBCT影像，使用INVIVODENTAL51分析軟件進行三維重建，在調(diào)整頭位后對其下頜體形態(tài)進行測量，測量項目包含截面的高度，截面上不同位點唇（頰）舌側(cè)骨質(zhì)寬度及皮質(zhì)骨厚度。采用SPSS190統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)錄入和分析，采用單因素方差分析，比較高角不同矢狀骨面型下頜體截面形態(tài)的差異；采用獨立樣本T檢驗比較不同矢狀骨面型不同性別間下頜體截面形態(tài)的差異。結(jié)果1骨性I類組、II類組、III類組的鄰牙截面高度（H）均表現(xiàn)為從頦聯(lián)合段至磨牙段逐漸減小的規(guī)律，且三組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。2骨性I類組、II類組、III類組的下頜體截面上13寬度（W1）均表現(xiàn)為從頦聯(lián)合部至遠中磨牙逐漸增加的規(guī)律，且三組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；三組的下頜體截面下13寬度W2均表現(xiàn)為頦聯(lián)合部比側(cè)切牙截面大，側(cè)切牙截面至第一磨牙截面又逐漸增加，而第二磨牙則小于第一磨牙，且三組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3骨性I類組、II類組、III類組的截面上13舌側(cè)皮質(zhì)骨厚度（A）均表現(xiàn)為從頦聯(lián)合截面至第一前磨牙段逐漸增加，從第二前磨牙截面開始，至第二磨牙截面逐漸減小的規(guī)律；三組的截面上13唇（頰）側(cè)皮質(zhì)骨厚度（B）均表現(xiàn)為從頦聯(lián)合至第一磨牙截面逐漸增加，第二磨牙截面減小的規(guī)律；三組的截面下13舌側(cè)皮質(zhì)骨厚度（C）均表現(xiàn)為從頦聯(lián)合截面至遠中磨牙逐漸減小，其中頦聯(lián)合截面至側(cè)切牙截面變化幅度較大；三組的截面下13唇（頰）側(cè)皮質(zhì)骨厚度（D）均表現(xiàn)為在側(cè)切牙截面較頦聯(lián)合段處小，而側(cè)切牙至遠中磨牙逐漸增加的規(guī)律；三組的截面基底部皮質(zhì)骨厚度（E）均表現(xiàn)為從頦聯(lián)合截面至尖牙截面逐漸增加，從尖牙截面至磨牙截面逐漸減小的規(guī)律。三組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4高角不同性別下頜體截面形態(tài)差異1）所有鄰牙間截面高度男性均大于女性，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P2）下頜體鄰牙間截面上13寬度男性女性，但只有左側(cè)尖牙遠中截面差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P3）鄰牙間截面上13唇（頰）側(cè)上L3皮質(zhì)骨厚度男性女性，但只有頦聯(lián)合截面，雙側(cè)尖牙截面及右側(cè)第二磨牙截面差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P4）鄰牙間截面下L3唇（頰）側(cè)皮質(zhì)骨厚度男性女性，但只有雙側(cè)第二磨牙截面，雙側(cè)尖牙截面，雙側(cè)側(cè)切牙截面，頦聯(lián)合截面差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P5高角III類男、女下頜體鄰牙間截面形態(tài)差異相比較下頜體鄰牙間截面上13寬度男性與女性的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P005）；鄰牙間截面上13唇（頰）側(cè)皮質(zhì)骨頦聯(lián)合截面與尖牙截面，男性大于女性差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P結(jié)論1、高角不同矢狀骨面型年輕成人下頜體截面高度、寬度及皮質(zhì)骨厚度，差異不顯著。2、高角年輕成人下頜體截面高度，男性顯著大于女性。3、高角年輕成人下頜體截面寬度、皮質(zhì)骨厚度均顯示男性大于女性，但差異不顯著。

簡介：目的了解大鼠牙齒在倍骼生和燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉2種不同修復(fù)材料充填的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)的移動情況。客觀評價在2種不同修復(fù)材料充填的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)能否產(chǎn)生牙齒移動，并比較2種不同修復(fù)材料充填的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)和正常對照側(cè)在牙齒移動距離以及牙周組織改建情況上是否存在差異。方法選擇44只6周齡健康的WISTAR雌性大白鼠，體重190±10G，SPF級無特定病原體動物，隨機分為倍骼生充填組和燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉充填組2組，每組22只。用2﹪鹽酸氯胺酮腹腔注射行全身麻醉后，用必蘭在上頜右側(cè)第一磨牙近中區(qū)行局部浸潤麻醉。于該區(qū)先行粘骨膜翻瓣術(shù)，再用電機裂鉆低速鉆孔，在上頜右側(cè)第一磨牙近中造成牙槽骨缺損區(qū)長寬深為3MMX2MM2MM，按組在缺損區(qū)分別填入2種材料倍骼生和燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉，大鼠上頜左側(cè)作為正常對照側(cè)。待充填術(shù)后12周，每組隨機處死2只大鼠，制作牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)組織學(xué)切片，行光學(xué)顯微鏡觀察牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)與正常骨之間的成骨情況，并在剩余40只大鼠上頜雙側(cè)安裝正畸加力裝置牽引上頜第一磨牙向近中移動，每2周加力1次。安裝正畸加力裝置后8周，即充填術(shù)后20周，處死全部大鼠，制作上頜兩側(cè)包含第一磨牙的牙周組織磨片，測量上頜第一磨牙近中移動距離，制作牙齒牙周聯(lián)合切片，觀察2種材料牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)成骨情況并進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果1充填術(shù)后12周組織學(xué)觀察倍骼生充填組的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)新骨已形成，呈均一的骨組織，與正常骨組織之間無明顯界限，但密度低于正常骨組織，并可見倍骼生顆粒吸收后留下的少量腔隙燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉充填組的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)新骨已形成，但密度低于正常骨組織，新骨周邊有類骨質(zhì)，類骨質(zhì)與材料間界限模糊，材料與骨組織融合為一體。2充填術(shù)后12周安裝正畸加力裝置后，2種材料充填的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)均可進行牙齒移動。3充填術(shù)后20周牙齒牙周聯(lián)合切片觀察可見倍骼生充填組的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)新骨呈完全均一的骨組織，與周圍正常骨之間無明顯界限，密度較12周時稍高，但仍低于正常骨組織，新生骨的束狀骨較正常骨少，細胞成分較多；燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉充填組的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)新骨呈完全均一的骨組織，與周圍正常骨之間無明顯界限，密度較12周時稍高，但仍低于正常骨組織。4安裝加力裝置后8周，即充填術(shù)后20周第一磨牙近中移動距離制作剩余40只大鼠上頜左右兩側(cè)磨片，倍骼生充填組第一磨牙向近中移動的距離平均X±S為152±026MM，燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉充填組第一磨牙向近中移動的距離平均為155±020MM，正常對照側(cè)第一磨牙向近中移動的距離平均為154±026MM。經(jīng)多樣本均數(shù)間兩兩比較的Q檢驗，3者間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。5充填術(shù)后20周牙齒牙周聯(lián)合切片牙周膜測量2組大鼠切片上均可見壓力側(cè)牙周膜變薄，牙周膜纖維形態(tài)不規(guī)則，牙周間隙變窄；張力側(cè)牙周膜增厚，牙周膜纖維拉伸變長，牙周間隙增寬。倍骼生充填組大鼠右側(cè)第一磨牙根尖牙周膜寬度在壓力側(cè)平均X±S為58±2ΜM，張力側(cè)平均為1146ΜM；燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉組大鼠右側(cè)第一磨牙根尖牙周膜寬度在壓力側(cè)平均為54±2ΜM，張力側(cè)平均為116±7ΜM；正常對照側(cè)第一磨牙根尖牙周膜寬度在壓力側(cè)平均為55±3ΜM，張力側(cè)平均為119±8ΜM。經(jīng)多樣本均數(shù)間兩兩比較的Q檢驗，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。6充填術(shù)后20周牙齒牙周聯(lián)合切片破骨細胞計數(shù)倍骼生充填組第一磨牙牙槽骨受壓側(cè)破骨細胞數(shù)X±S為87±04個；燒結(jié)的羥基聚磷酸鈣鈉組第一磨牙牙槽骨受壓側(cè)破骨細胞數(shù)為89±08個；正常對照側(cè)第一磨牙牙槽骨受壓側(cè)破骨細胞數(shù)為90±06個。經(jīng)多樣本均數(shù)間兩兩比較的Q檢驗，3者間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論12種材料充填的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)可以進行正畸牙齒移動。22種材料充填的牙槽骨缺損修復(fù)區(qū)的第一磨牙近中移動距離及牙周組織受正畸力后的改建情況，均與正常對照側(cè)無顯著差別。

簡介：分類號R781密級公開◎∥單位代碼10422學(xué)號201214000蔡辦呈碩士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位論文題目白及多糖／羥丙基殼聚糖／珍珠層粉復(fù)合材料促下頜骨缺損修復(fù)的動物實驗研究STUDYOFMOUSEALVEOLARBONEDEFECTREP2URATIONBYBLETILLAS仃IATAGLUCOMA衄A／HYDROXYPROPYLCHITOSAN／NANO_NACREPOWDERCOMPOSITEDSCAFFOLDS作者姓名學(xué)院名稱陳怡憾口腔醫(yī)學(xué)院專業(yè)學(xué)位名稱口腔醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師合作導(dǎo)師孫欽峰教授2015年4月28日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要1英文摘要3符號說明6前言一7材料和方法14結(jié)果19結(jié)論。29附圖30參考文獻35致謝42攻讀學(xué)位期問發(fā)表的學(xué)術(shù)論文43

簡介：背景假體周圍炎性骨溶解是人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后的嚴重并發(fā)癥。腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導(dǎo)因子TUMNECROSISFACTLIKEWEAKINDUCEROFAPOPTOSIS，TWEAK是1997年新發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子配體超家族中的一員。TWEAK在人體多種組織中均有表達，是一種廣泛表達的腫瘤壞死因子家族的配體。多種免疫細胞（單核巨噬細胞，樹狀突細胞，活化的T細胞等）均可產(chǎn)生其可溶性的細胞因子形式。在急慢性炎癥或損傷的情況下，TWEAK表達顯著增加。已經(jīng)越來越多研究發(fā)現(xiàn)，TWEAK通過與其受體相結(jié)合，發(fā)揮各種各樣的生物學(xué)效應(yīng)，包括釋放促炎性因子、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、刺激細胞凋亡以及調(diào)節(jié)組織修復(fù)與再生。TWEAK能促激活經(jīng)典的核轉(zhuǎn)錄因子ΚBNUCLEARFACTΚBNFΚB通路，除此之外，研究發(fā)現(xiàn)，TWEAK還可激活非經(jīng)典的NFΚB通路以及絲氨酸蘇氨酸絲裂原激活蛋白MITOGENATIVATEDPROTEINKINASE，MAPK激酶通路。MAPKS信號通路具有生物進化的高度保守性，廣泛存在于細胞內(nèi)，其主要功能是將細胞外刺激信號傳遞到細胞內(nèi)，并引起細胞的一系列生物學(xué)反應(yīng)。目前已發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)有多條MAPK通路細胞外信號調(diào)節(jié)激酶EXTRACELLULARSIGNALREGULATEDKINASE，ERK1ERK2通路、CJUN氨基末端激酶CJUNNTERMINALKINASE，JNK通路又稱為應(yīng)激活化蛋白激酶STRESSACTIVATEDPROTEINKINASE，SAPK、P38MAPKP38Α，P38Β，P38YP38Δ通路和ERK3ERK4ERK5通路。其中P38MAPK是MAPK家族的重要成員，當(dāng)他們受到環(huán)境應(yīng)激或細胞因子刺激時，能使效應(yīng)細胞產(chǎn)生增殖、分化、遷移、浸潤和炎癥等生命活動。P38MAPK的抑制劑SB203580，為吡啶咪唑類衍生物，能特異性地作用于P38ATP結(jié)合活性位點THR106，使P38失去了與ATP結(jié)合的能力，從而使其失去激酶活性。白介素6INTERLEUKIN6，IL6是一種多功能的細胞因子，主要由單核細胞、淋巴細胞、成纖維細胞等分泌，發(fā)揮一系列的免疫效應(yīng)。單核細胞趨化蛋白1MONOCYTECHEMIATTRACTANTPROTEIN1，MCP1屬于趨化因子超家族的一員，其主要功能是通過趨化作用，使單核細胞離開血流而分化成為分布于組織中的巨噬細胞，參與著機體的免疫和炎癥反應(yīng)。研究表明這些因子都參與著關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體周圍無菌性松動的病理過程隨著對炎性骨溶解研究的深入，特別是在溶骨性因子，受體配體家族成員及其細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路對破骨前體細胞分化、成熟及破骨細胞活化、功能影響方面研究的進展，針對骨溶解機制中某一環(huán)節(jié)進行干預(yù)成為可能。目前已有少量文獻報道，P38MAPK信號通道參與了磨損微粒誘導(dǎo)的骨溶解這一病理過程，ZWERINA等人通過風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的小鼠模型研究，不僅發(fā)現(xiàn)P38MAPK對于炎性骨破壞起著重要作用，同時還發(fā)現(xiàn)抑制P38MAPK是減輕炎性骨破壞的重要手段。此外，在臨床上對狼瘡腎炎、肌炎等疾病的研究中發(fā)現(xiàn)，P38MAPK信號通道能被TWEAK激活，并發(fā)揮致病作用。但是P38MAPK信號通道在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動的界膜組織中如何表達，尚存在爭議。而TWEAK作為TNF配體超家族的成員是否也參與假體周圍無菌性松動的發(fā)生和發(fā)展，尚未見文章報道?；谝陨系睦碚撝?，本研究擬通過組織形態(tài)學(xué)觀察及分子生物學(xué)實驗方法，探討人工關(guān)節(jié)假體周圍骨溶解的相關(guān)問題。1在松動假體周圍界膜組織中，TWEAK和P38MAPK表達情況，探討其表達與假體松動的相關(guān)性。2用鈦微粒刺激體外培養(yǎng)巨噬細胞RAW2467，通過P38MAPK抑制劑進行干預(yù)，觀察TWEAK及P38MAPK的表達，探討TWEAKP38MAPK信號通過在其中可能的作用機制。3制備小鼠顱骨骨溶解的動物模型，用P38MAPK抑制劑進行干預(yù)，觀察TWEAK及P38MAPK的表達，探討TWEAKP38MAPKIL6MCP1信號通道在炎性骨溶解中的作用，以及P38MAPK抑制劑對人工關(guān)節(jié)無菌性松動靶向治療的可能性。一TWEAK及P38MAPK在關(guān)節(jié)松動假體周圍界膜組織中的表達及臨床意義方法研究不同來源的滑膜組織及松動假體周圍界膜組織（正?；?、骨關(guān)節(jié)炎滑膜、界膜），通過HE染色和免疫組織化學(xué)染色，對組織標(biāo)本進行定性觀察。通過RTPCR和WESTERNBLOT等分子生物學(xué)實驗方法檢測組織中TWEAK及P38MAPK的表達，對組織標(biāo)本進行定量觀察。結(jié)果HE染色結(jié)果顯示，與正?；そM比較，骨關(guān)節(jié)炎滑膜組基質(zhì)和纖維細胞較多，少許炎性細胞浸潤，鏡下見滑膜細胞，但其增生不明顯。而在界膜組中滑膜細胞增生明顯伴有局灶性炎性細胞浸潤，顯微鏡下可見有大量的單核細胞，在細顆粒狀物周圍尤為明顯。TWEAK的免疫組化染色結(jié)果顯示，界膜組中可見大量胞質(zhì)呈棕黃色的單核細胞（陽性細胞）骨關(guān)節(jié)炎滑膜組中可見散在的胞質(zhì)呈棕黃色的單核細胞正?；そM中陽性細胞更少。PP38MAPK的免疫組化染色結(jié)果與TWEAK鏡下觀察結(jié)果類似。在界膜組的TWEAKMRNA以及蛋白的表達要明顯高于正?；そM及骨關(guān)節(jié)炎滑膜組，并且骨關(guān)節(jié)炎滑膜組的TWEAKMRNA以及蛋白表達水平亦高于正常的滑膜組。PP38MAPK蛋白表達情況與TWEAK表達類似，在界膜組中最高，關(guān)節(jié)炎組次之，正常滑膜組最少，兩兩比較均由統(tǒng)計學(xué)差異。TWEAK和PP38MAPK表達呈正相關(guān)。結(jié)論TWEAK可能是炎性骨溶解的啟動因素之一，P38MAPK可能是參與調(diào)控磨損微粒誘導(dǎo)骨溶解的中心環(huán)節(jié)，進一步探索TWEAK及P38MAPK在假體周圍炎性骨溶解中的作用機制，對臨床防治人工關(guān)節(jié)無菌性松動具有重要意義。二P38MAPK抑制劑對鈦微粒刺激巨噬細胞分泌炎性因子的影響方法體外培養(yǎng)巨噬細胞RAW2467，分組A組對照組（細胞單純培養(yǎng)組），B組ASB203580（特異性P38MAPK阻斷齊），C組ATIPS，D組ATIPSSB203580。將上述各組分別加入24孔培養(yǎng)板，在5％CO2，37℃，95％濕度條件下孵育48小時候收集細胞及細胞培養(yǎng)上清。采用WESTERNBLOT分別檢測TWEAK及PP38MAPK的蛋白表達水平。采用ELISA法分別檢測細胞培養(yǎng)上清中IL6，MCP1表達水平。結(jié)果TWEAK蛋白的表達C組較A組、B組和D組明顯增加P＜005。且D組較A組B組明顯增加P＜005。PP38MAPK蛋白表達C組明顯高于A組，B組及D組P＜005。A組明星高于B組、D組P＜005，B組，D組兩組間沒有明顯差異。細胞培養(yǎng)上清中，IL6和MCP1的表達C組較A組、B組和D組明顯增加P＜005，A組，B組兩組間沒有明顯差異。結(jié)論鈦微粒能刺激巨噬細胞通過激活P38MAPK信號通路分泌炎性因子，而SB203580能通過抑制P38MAPK，減輕巨噬細胞的炎性因子分泌，因此推測TWEAKP38MAPKIL6MCP1信號通道在微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解中發(fā)揮著重要作用。進一步探索P38MAPK信號通路，對臨床防治人工關(guān)節(jié)無菌性松動具有重要意義。三P38MAPK抑制劑對鈦微粒誘導(dǎo)炎性骨溶解的實驗研究方法雄性C57BLJ6小鼠體重1822G，1214周齡。隨機分成假手術(shù)組（A組）、SB203580組（B組）、TIPS植入組（C組）和TIPS植入SB203580組（D組），SB203580以01MGKGD腹膜內(nèi)注射。術(shù)后兩周取材，采用TRAP染色觀察骨溶解動物模型里的破骨細胞形態(tài)及數(shù)量，ELISA法檢測動物模型的炎性細胞因子。結(jié)果TRAP染色結(jié)果顯示，在C組（TIPS的顱骨模型）可見大量破骨細胞形成，呈紫紅色，散在或者連續(xù)存在。而沒加TIPS的A組和B組中，均沒見到破骨細胞及骨破壞。在D組（TIPSSB203580的顱骨模型）中，僅在顱骨溶解邊緣有少量紫紅色細胞，陽性細胞較C組明顯減少。顱骨骨破壞也較C組明顯減輕。ELISA結(jié)果顯示，C組在鈦微粒的刺激誘導(dǎo)下，TWEAK、PP38MAPK、IL6和MCP1的含量要明顯高于其他三組P＜005。而D組由于有SB203580的干預(yù)，不僅PP38MAPK得到了明顯的抑制，TWEAK，IL6，MCP1表達也明顯減少。與C組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。其余三組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論SB203580能通過抑制P38MAPK信號通路，降低炎性因子的表達，抑制破骨細胞的生成，減輕鈦微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解。因此，我們認為，TWEAKP38MAPKIL6MCP1信號通道在微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解中發(fā)揮著重要作用。抑制P38MAPK信號通路可能成為抑制炎性骨溶解的新途徑，進一步研究P38MAPK信號通路對臨床防治人工關(guān)節(jié)無菌性松動具有重要意義。

簡介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文杜興氏肌營養(yǎng)不良高危家族的產(chǎn)前基因檢測姓名涂澤蓉申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師常青20080501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文診斷中，于孕中期取羊水20M1，孕后期采臍血為樣本2ML，提取樣本DNA。3引物合成1對性別決定基因SYR引物，DYSTROPHIN基因的18對外顯子引物和5對CAN引物均在NCBI上采用BLAST工具做比對，確定了所有引物準確性。方法先用SRY引物進行PCR擴增判斷胎兒性別，而后采用MPCR方法檢測DMD患者如檢測出有外顯子缺失的患者，再用單管PCR檢測胎兒相應(yīng)位點，檢測男性胎兒是否缺失。對女性胎兒或未檢出外顯子缺失的男性胎兒，則采用STR_PCR擴增進行家系連鎖分析，以檢測胎兒的風(fēng)險，進行DMD的產(chǎn)前基因診斷。建立穩(wěn)定PCR反應(yīng)體系1SYR引物的PCR反應(yīng)體系總體積25U1，含有基因組DNA50NG，DNTP各200啪01／L，引物各02眥。兒，1XBUE絎，TA明酶用量2U。2MPCR反應(yīng)體系總體積15U1，含有基因組DNALOOILG，DNTP各200吼101／L，引物各02啪。兒，1XBUE倚，TARQ酶用量3U，引物分四組A、B、C、D組。3STR_PCR反應(yīng)體系總體積25UL，含有基因組DNA50NG，DNTP各200UMO兒，引物各02UMON。，1XBUE臟，TA明酶用量2U。性別決定基因SRY引物的PCR擴增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠電泳，18對外顯子引物的N1PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)3％瓊脂糖凝膠電泳，CAN引物PCR擴增產(chǎn)物在12％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，均采用SYRBGREEN熒光染料，自動凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果。結(jié)果胎兒性別決定基因檢測，共檢出4例胎兒，其中2例單胎和1例雙胎之甲胎為男性，1例雙胎之乙胎為女性，胎兒性別基因檢測結(jié)果均完全與胎兒羊水細胞的核型分析相符，且與胎兒出生后性別完全相同。采用INPCR結(jié)合STRPCR方法對4例DMD患者的高危家族進行產(chǎn)前基因突變類型檢測結(jié)果表明4例DMD患者中有2例檢測出DYS仃OPH證基因外顯子的缺失，L例DMD患者為50，5L二個外顯子缺失，另1例雙胎孕婦高危家族中DMD患者檢測出43外顯子缺失，同時對雙胎之男胎進行DYS怕PHIN基因43外顯子檢測，未發(fā)現(xiàn)男胎有43外顯子缺失。2例缺失型DMD患者的外顯子缺失位點主要集中在中央缺失熱區(qū)44～52內(nèi)，這與以往的研究較為一致。另2例DMD患者的18對外顯子引物的MPCR未檢測到DYSTROPHIN基因外顯子的缺失，為非缺失型DMD患者。對3例DMD高危家族包括2例非缺失型DMD高危家族和1例缺失型D加雙胎高危家族進行STRPCR的DYS仃OPHIN基因檢測發(fā)現(xiàn)3例DMD高危家族的4例胎兒均繼承了與患者相同的母源致病單體型，除1例雙胎之女胎為風(fēng)險基因攜帶者外，其余3例男胎均為DMD高危胎兒，3例患者母親均為雜合型，同時3例家族的其它成員均未檢測DYSTROPLLIN基因內(nèi)含子缺失，嚴格遵循了孟德兒遺傳規(guī)律。

簡介：目的運用表面肌電圖定量分析經(jīng)肌電生物反饋儀治療后患側(cè)股直肌、股內(nèi)側(cè)肌、股外側(cè)肌的肌力，探討肌電生物反饋儀對膝關(guān)節(jié)肌力恢復(fù)的療效。方法膝關(guān)節(jié)僵硬患者28例，男性19例，女性9例平均年齡3553±920（18～55歲），身高17389±872159～183CM，體重7164±100752～83KG，病程1282±803（3～24周）。隨機分成治療組和對照組，每組14例，治療組和對照組兩組患者的年齡、身高、體重及病程運用統(tǒng)計軟件進行比較，均無統(tǒng)計學(xué)差異P＞005，所以兩組患者在治療前一般情況處于同一基線，具有可比性。兩組患者均給予常規(guī)康復(fù)治療，包括蠟療、運動療法、冷療對照組采用常規(guī)康復(fù)治療治療組采用常規(guī)康復(fù)治療輔以肌電生物反饋（廣州晶冠科技，型號565）治療。分別于治療前及治療后4周利用表面肌電圖（海神型號NDI092）采集股外肌VL股直肌RF和股內(nèi)肌VM的相對均方根振幅RMS進行比較，判斷治療前后患者這三組肌肉肌力的變化，所有數(shù)據(jù)均進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果1、對照組治療前股直肌RF、股內(nèi)肌VM和股外肌VL的相對增長的均方根振幅RMS均數(shù)為9641±10744，13380±14308，13353±14374，治療后股直肌RF和股內(nèi)肌VM股外肌VL的相對增長的均方根振幅RMS均數(shù)為17304±7275，16738±8719，37273±30945，兩組數(shù)據(jù)行T檢驗，VL組數(shù)據(jù)均有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005其余兩組無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005治療組治療前股直肌RF、股內(nèi)肌VM和股外肌VL的均方根振幅RMS均數(shù)為13642±3193，12183±9178，13486±9017，治療后股直肌RF、股內(nèi)肌VM和股外肌VL的均方根振幅RMS均數(shù)為32905±22213，34373±25682，74499±61112，三組數(shù)據(jù)行T檢驗，均有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005治療組評價指標(biāo)的改善程度明顯優(yōu)于對照組結(jié)論常規(guī)康復(fù)治療可以改善患膝的肌力，但配合肌電生物反饋療法療效更顯著。

簡介：目的分析比較RHBMP2復(fù)合物與自體髂骨移植后植骨融合率的差異。方法檢索了COCHRANELIABRARYCCTR以及COCHRANE協(xié)作網(wǎng)專業(yè)試驗數(shù)據(jù)庫，MEDLINE19662006，EMBASE19802006，PUBMED19662006，NRRWWWUPDATESOFTWARECOMNATIONAL，CCTWWWCONTROILEDTRIALSCOM。包括中國生物醫(yī)學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫CBM，手工檢索中文骨科文獻。收集了有關(guān)RHBMP2復(fù)合物與自體髂骨應(yīng)用于腰椎手術(shù)的臨床隨機對照試驗，并對納入研究的方法學(xué)質(zhì)量進行了評價。統(tǒng)計軟件采用COCHRANE協(xié)作網(wǎng)提供的REVMAN429。結(jié)果共納入有關(guān)RHBMP2復(fù)合物與自體髂骨應(yīng)用于脊柱手術(shù)當(dāng)中的臨床隨機對照試驗4篇共364例病人。META分析表明，重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2BMP2復(fù)合物對比自體髂骨在治療腰椎疾病的手術(shù)當(dāng)中，其術(shù)后6個月植骨融合率存在差異368，95％CI151，902，P0004，而術(shù)后遠期12個月至24個月的植骨融合率則更為明顯的高于自體髂骨459，95％CI174，1214，P0002，及425，95％CI193，939，P00003。結(jié)論重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2復(fù)合物用于腰椎疾病的手術(shù)治療時，其中遠期植骨融合率的效果明顯優(yōu)于自體髂骨。初步證明了重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2在行脊柱融合術(shù)時的安全性和有效性及對自體髂骨的替代的作用。因本系統(tǒng)評價納入的某些臨床RCT試驗病例數(shù)比較少，結(jié)論有待進一步確認，尚需更多設(shè)計嚴格的大樣本隨機對照研究以增加證據(jù)的強度。

簡介：背景與目的MAURO1等1961年首次在蛙骨骼肌中發(fā)現(xiàn)，肌衛(wèi)星細胞是一種源于胚胎中胚層的干細胞。肌衛(wèi)星細胞的增殖和成肌分化受到多種生長因子的調(diào)節(jié)，有人推測其中的基質(zhì)衍生因子1SDF1、肝細胞生長因子HGF和胰島素樣生長因子1IGF1等三個因子在肌肉再生的起始階段可能起著重要作用。細胞因子需通過相應(yīng)受體的介導(dǎo)才能發(fā)揮其功能，而基質(zhì)細胞衍生因子受體CXCR4、肝細胞生長因子受體CMET和胰島素樣生長因子1受體IGF1R被認為是上述三個因子的特異性受體。本課題旨在觀察CXCR4，CMET和IGF1R在正常肌肉組織和注射心臟毒素后所致的肌肉損傷的股四頭肌中肌衛(wèi)星細胞的表達情況，為進一步研究某些肌肉變性疾病如進行性肌營養(yǎng)不良DMD在發(fā)病中的分子機制和治療肌肉退行性變提供參考依據(jù)。方法C57雄性小鼠14只，飼養(yǎng)于IVC獨立送排風(fēng)籠具實驗室。隨機分為7組，1～6組左側(cè)股四頭肌局部注射心臟毒素5ΜG只，右側(cè)股四頭肌為對照，第7組用于分離正常肌衛(wèi)星細胞。1～6組分別在注射后1D，4D、1W、2W、4W、6W頸椎脫臼處死小鼠，完整分離出股四頭肌。浸入4％甲醛溶液中固定，常規(guī)病理包埋切片染色，與對照C57小鼠股四頭肌進行組織學(xué)和免疫組織化學(xué)比較分析。取上述股四頭肌與對照C57小鼠股四頭肌進行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)RTPCR比較分析，了解三個受體的原位表達情況。從非注射組C57小鼠股四頭肌中分離出肌衛(wèi)星細胞，觀察細胞生長情況，利用免疫細胞化學(xué)方法和流式細胞技術(shù)，檢測三個受體在肌衛(wèi)星細胞的體外表達情況。結(jié)果免疫組織化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)結(jié)果顯示正常小鼠股四頭肌中CXCR4，CMET和IGF1R在肌衛(wèi)星細胞上僅有少量的表達；與對照組比較，實驗組注射心臟毒素24H后，三個受體表達即明顯增加并持續(xù)到觀察終點的第六周，其中CXCR4、IGFIR表達量在第二周達到高峰，CMET表達量在第一周達到高峰，且直到觀察期間末第6周，其表達量仍高于正常肌肉組織。從非注射組股四頭肌分離的肌衛(wèi)星細胞做免疫細胞化學(xué)和流式細胞檢測顯示CXCR4、CMET和IGF1R僅有少量的表達，其中流式細胞檢測結(jié)果CXCR4陽性表達率為46％，CMET陽性表達率為30％，IGF1R陽性表達率為33％。結(jié)論1本文首次使用心臟毒素骨骼肌注射模型，探討CXCR4、CMET和IGFIR在骨骼肌再生過程中的作用；結(jié)果提示，CXCR4、CMET和IGF1R可能是肌肉損傷修復(fù)過程的關(guān)鍵蛋白。2本實驗通過改進骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)方法，使肌衛(wèi)星細胞純度明顯增高。

簡介：血管加壓素AVP是由神經(jīng)垂體分泌的九肽激素，主要的生理作用是收縮血管和抗利尿。AVP受體屬于G蛋白偶聯(lián)的膜受體，包括V1血管受體V1RS、V2腎臟受體V2RS和V3垂體受體V3RS三個亞型。AVP作為一種非腎上腺素能縮血管物質(zhì)，已廣泛應(yīng)用于臨床治療，為危重病人提供血壓支持或抑制胃腸道出血等。但該治療方法常伴有消化道損傷，這可能與AVP減少組織灌流引起缺血性組織損傷或影響消化道平滑肌收縮功能有關(guān)。已有報道證明AVP受體在人胃腸道上廣泛表達。AVP對胃腸道動力的影響存在濃度依賴性，且存在種屬間差異。生理水平的AVP不改變大鼠和人結(jié)腸平滑肌收縮，但外源性AVP或應(yīng)急狀態(tài)下血液中AVP濃度增高對消化道運動的影響及其機制尚不明確。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)靜脈注射AVP引起大鼠結(jié)腸收縮減弱。一氧化氮NO是胃腸道平滑肌主要的舒張因子，由一氧化氮合酶NOS催化底物L(fēng)精氨酸分解生成。NO在消化道各部分生理病理功能調(diào)節(jié)中起到重要作用，影響食管下部括約肌、幽門、ODDI括約肌和肛門等處平滑肌張力，參與腸蠕動反射。大量研究證明NOS抑制劑可以延遲胃排空和阻礙結(jié)腸運動。細胞內(nèi)NOS蛋白表達下降引起局部NO量合成減少可能與多種消化道動力異常有關(guān)。有研究提示AVP促進心肌纖維原細胞生成NO，因此我們推測AVP可能通過激活一氧化氮合酶NOS，增加NO釋放而抑制結(jié)腸平滑肌收縮。本研究將對以上假設(shè)進行驗證。材料與方法實驗動物實驗選用雄性WISTAR大鼠，體重約為280G～320G，實驗前禁食12HR，自由飲水。離體肌條制備快速犧牲大鼠，距回盲部1CM處取近端結(jié)腸組織。沿腸系膜方向?qū)⒛c管剪開，用KREBS液反復(fù)沖洗后，黏膜面朝上固定在石蠟盤中，盤內(nèi)持續(xù)通有95％O2和5％CO2的混合氣體。用眼科剪仔細去除黏膜。沿垂直于腸軸方向?qū)⒔M織剪裁為83MM大小的近端結(jié)腸環(huán)行肌條。離體肌條收縮活動記錄將處理好的肌條放置于灌流浴槽中。浴槽內(nèi)盛有5ML37℃KREBS液和持續(xù)通有95％O2和5％CO2的混合氣體。肌條一端固定在浴槽底部的玻璃彎鉤上，另一端與張力換能器相連。肌條收縮活動以張力信號形式輸入生理記錄儀。肌條在1G的前負荷下孵育60MIN，每隔15MIN換用新鮮的37℃KREBS液沖洗，待其自發(fā)收縮穩(wěn)定后開始實驗。每個環(huán)行肌條只接受一次AVP處理。加藥后，連續(xù)記錄肌條收縮活動30MIN。在需要用阻斷劑預(yù)處理的實驗中，肌條先用阻斷劑孵育10MIN～30MIN，然后再加入AVP處理。所用阻斷劑包括DEAMINOPEN1，OMETYR2，ARG8VASOPRESSINV1880，V1受體V1RS阻斷劑，PYRROLIDINEDITHIOCARBAMATEPDTC，NFΚB阻斷劑，NGNITROLARGININEMETHYLESTERLNAME，NOS非特異性阻斷劑，SMETHYLISOTHIOURESMT，INOS特異性阻斷劑，TETRODOTOXINTTX，河豚毒素和NPROPYLLARGININENPLA，NNOS特異性阻斷劑。免疫組化取大鼠近端結(jié)腸組織，用4％多聚甲醛固定后，石蠟包埋，制成厚4ΜM的切片。石蠟切片經(jīng)脫蠟、水化處理，再用3％H2O2孵育10MIN，以滅活其中內(nèi)源性過氧化物酶。磷酸鹽緩沖液PHOSPHATEBUFFERSOLUTION，PBS沖洗三次，5％牛血清封閉1HR，然后加兔抗INOS1200抗體或羊抗V1RS抗體11004℃過夜。PBS沖洗，滴加生物素標(biāo)記的二抗工作液室溫孵育30MIN。沖洗后，滴加辣根過氧化物酶HSERADISHPEROXIDASE，HRP標(biāo)記鏈酶卵白素工作液室溫孵育30MIN。PBS沖洗三次，最后用3，3二氨基聯(lián)苯胺DIAMINOBENZIDINE，DAB鏡下顯色，蘇木素復(fù)染。PBS代替一抗孵育切片作為陰性對照。免疫熒光雙標(biāo)V1RS和NEUN制備大鼠近端結(jié)腸石蠟切片。5％牛血清封閉后，同時滴加羊抗V1RS多克隆抗體1100和小鼠抗神經(jīng)元細胞核NEURONALNUCLEI，NEUN單克隆抗體1100。將切片置于濕盒內(nèi)，4℃過夜。PBS沖洗后，同時滴加四甲基異氰酸羅達明TRITC兔抗羊IGG150和異硫氰酸熒光素FITC標(biāo)記兔抗小鼠IGG150，室溫孵育1HR。V1RS和INOS實驗步驟同前，使用的一抗為羊抗V1RS多克隆抗體1100和兔抗INOS多克隆抗體1200。使用二抗為FITC標(biāo)記驢抗羊IGG150和TRITC標(biāo)記驢抗兔150。熒光顯微鏡下觀察免疫陽性細胞，拍照。細胞核蛋白漿蛋白的提取取大鼠近端結(jié)腸環(huán)行肌條，經(jīng)AVP或生理鹽水NS處理5MIN后，加入細胞漿蛋白抽提試劑A勻漿。將勻漿液劇烈震蕩，4℃離心，吸取上清即為抽提得到的細胞漿蛋白液。隨后，完全吸盡殘余的上清，沉淀內(nèi)加入50ΜL添加了苯甲基磺酰PHENYLMETHANESULFONYLFLUIDE，PMSF的細胞核蛋白抽提試劑B，4℃震蕩30MIN，4℃，12000G離心10MIN，吸取上清即為抽提得到的細胞核蛋白。WESTERNBLOT用蛋白濃度測定試劑盒對以上蛋白提取液進行定量分析。電泳結(jié)束后用濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，室溫下5％脫脂奶粉封閉1HR，TTBSTRISBUFFERSALINEWITHTWEEN20多次沖洗。使用兔抗INOS1500、兔抗NFΚBP651500或兔抗ⅠΚB1800一抗孵育4℃過夜。TTBS沖洗，室溫下辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗120000孵育1HR。ECL顯影。NO含量的測定取大鼠近端結(jié)腸環(huán)行肌條，去黏膜，經(jīng)AVP108MOLL或生理鹽水NS處理5MIN后勻漿。勻漿液在4℃離心5MIN4000G后，取50ΜL上清液與GRIESS試劑Ⅰ和Ⅱ室溫混合孵育。酶標(biāo)儀560NM測定其吸光度。統(tǒng)計分析離體肌條實驗實驗中持續(xù)記錄肌條等長收縮。定量分析時，軟件對曲線下面積每10S做一次積分，1MIN內(nèi)積分總和與時間60S的比值則為該時間段內(nèi)的肌條平均張力。加藥前肌條平均張力值作為參考值，并標(biāo)準化為1；加藥后肌條平均張力值與該參考值的比值為R值。WESTERNBLOT應(yīng)用SCIONIMAGE分析軟件進行蛋白定量分析。內(nèi)參蛋白胞核蛋白，CJUN；胞漿蛋白，ΒACTIN的灰度值標(biāo)準化為100％，目的蛋白的灰度值與內(nèi)參蛋白的灰度值之比為統(tǒng)計指標(biāo)。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準誤表示，采用單因素方差分析和T檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理，以P結(jié)果1AVP對大鼠近端結(jié)腸環(huán)行肌收縮的影響。孵育液中加入AVP108MOLL后環(huán)行肌收縮明顯減弱，加藥后5MIN肌條張力降至最低，R值降為063±006P005，N13。外源性AVP1010～103MOLL使肌條自發(fā)收縮減弱，且該作用呈劑量反應(yīng)關(guān)系。當(dāng)AVP濃度低至1011MOLL時AVP不影響肌條收縮。V1RS特異性阻斷劑V1880107MOLL可以消除AVP108MOLL對肌條收縮的抑制作用。V1880107MOLL本身對肌條收縮活動無明顯影響。2NOS抑制劑的作用。LNAMENOS非特異性阻斷劑，104MOLL和NPLANNOS特異性阻斷劑，107MOLL能夠增強大鼠結(jié)腸環(huán)行肌條自發(fā)性收縮，而SMTINOS特異性阻斷劑，103MOLL對肌條收縮無影響。肌條用生理鹽水NS、LNAME104MOLL或NPLA107MOLL處理5MIN后，其R值分別為091±002N15、102±006，N15，P3腸神經(jīng)系統(tǒng)的作用。TTX河豚毒素本身能夠興奮大鼠結(jié)腸環(huán)行肌收縮。肌條浴液中加入TTX105MOLL5MIN后，張力R值從091±002對照組升高到107±004。TTX105MOLL預(yù)處理后再加AVP，AVP抑制環(huán)行肌條收縮的作用明顯減弱。4AVP對INOS表達和NO產(chǎn)生的影響。AVP108MOLL處理肌條后，其INOS表達和NO生成量明顯增加。肌條用AVP108MOLL處理后5MIN，組織中NO濃度由1372ΜMOLL±06ΜMOLL對照組增加到為2376ΜMOLL±09ΜMOLLP5AVP對NFΚB活性的影響。肌條組織經(jīng)AVP108MOLL孵育5MIN后胞漿內(nèi)ⅠΚB表達明顯減少，而胞核內(nèi)NFΚBP65表達增加。AVP108MOLL處理肌條5MIN后用WESTERNBLOT測蛋白表達量變化，加藥組與對照組相比其胞漿內(nèi)ⅠΚB蛋白量減少了263％±536％P6免疫熒光定位V1RS和INOS。V1RS陽性細胞位于正常大鼠近端結(jié)腸腸神經(jīng)叢內(nèi)。免疫熒光雙標(biāo)證實V1RS和NEUN共同表達與肌間神經(jīng)元。AVP107MOLL處理5MIM后結(jié)腸組織INOS陽性細胞位于肌間神經(jīng)叢內(nèi)，而用生理鹽水NS處理的樣本內(nèi)并無INOS表達。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果證實INOS與V1R共同表達于肌間神經(jīng)元。結(jié)論AVP能夠抑制大鼠近端結(jié)腸環(huán)行肌收縮，此作用是通過激活腸肌間神經(jīng)元中的NFΚBINOS和NNOS兩條通路引起NO生成增多而實現(xiàn)的。

簡介：本課題創(chuàng)新地提出一種骨內(nèi)金屬植入體與生物可降解骨引導(dǎo)材料配伍使用的方法旨在利用可降解生物材料填充金屬骨內(nèi)植入體腔洞內(nèi)在植入體植入體內(nèi)后逐漸引導(dǎo)骨組織長入腔洞同時阻止軟組織的長入從而實現(xiàn)種植體在骨內(nèi)牢固的機械固定選擇適當(dāng)?shù)目山到庑陨锊牧鲜潜菊n題的研究關(guān)鍵本論文選用ΑCAPOΑTCP骨水泥粘結(jié)ΒCAPOΒTCP粉末并結(jié)合雙氧水造孔的新工藝制備可降解鈣磷材料采用生物活性骨水泥水化后粘結(jié)ΒTCP制備一種復(fù)合膠凝體系的新方法可在常溫下進行免于燒結(jié)可成型復(fù)雜的樣品并具有一定的強度骨水泥水化后生成的羥基磷灰石HAP與ΒTCP構(gòu)成了雙相多孔陶瓷通過實驗確定了ΑTCP與ΒTCP的最佳配比為11雙氧水造孔孔徑受雙氧水濃度影響雙氧水濃度越高孔徑越大當(dāng)雙氧水濃度達到15﹪時能制出較理想的孔用三維視頻顯微鏡X射線衍射分析法掃描電鏡等測試手段對此新工藝制成的材料的組成結(jié)構(gòu)及性能進行表征本論文還通過體外實驗對多孔磷酸鈣陶瓷在模擬體液中類骨磷灰石形成的過程和影響因素進行了探討

簡介：目的探討小骨窗開顱血腫清除術(shù)和血腫腔穿刺外引流術(shù)兩種手術(shù)方法在治療幕上高血壓腦出血HICH中近期療效的差別。方法小骨窗開顱血腫清除術(shù)組廣西醫(yī)科大學(xué)第九附屬醫(yī)院神經(jīng)外科2006年01月至2007年10月小骨窗開顱血腫清除的31例HICH；血腫腔穿刺外引流術(shù)組第九附屬醫(yī)院同期神經(jīng)外科行血腫穿刺外引流治療的HICH37例，比較兩組病人在病死率、改善幸存者近期生活質(zhì)量以及再出血率方面的差異。結(jié)果小骨窗組的病死率，GOSGLASGOWOUTCOMESCALE近期預(yù)后優(yōu)良率，再出血率分別是16％，48％，13％，而穿刺組的病死率，GOS近期預(yù)后優(yōu)良率，再出血率分別是38％，35％，11％，小骨窗組的病死率低于血腫腔穿刺組，小骨窗組與血腫穿刺組在再出血率、改善幸存者近期生存質(zhì)量方面沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差別。結(jié)論對于幕上腦葉內(nèi)血腫，特別是出血量≤60ML的中等出血量以下的患者，小骨窗開顱血腫清除術(shù)能夠降低病死率，而對基底節(jié)內(nèi)腦出血，兩種手術(shù)方法在降低病死率方面沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差別；而且兩種手術(shù)方法對于改善幸存者的近期生活質(zhì)量以及降低再出血率方面沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差別。

簡介：Y’79G706分類號密級單位代碼Q2Z學(xué)號2QQ22壘Q西北大學(xué)碩士學(xué)位論文題目復(fù)麥焦叢量壘焦叢里量壁廛周墮叢萎繾鮑墮望笠周盈甚墊劍鮑壁窒指導(dǎo)教師高垂羞專業(yè)技術(shù)職務(wù)割耋噬學(xué)科專業(yè)邊塹堂答辯日期20056學(xué)位授予日期二零零五年五月。。駕潞慕嫩簽蠢荷大鼠血液流變性的影響。結(jié)果1不同劑量梯度的健肌I號和健肌N號對后肢去負荷大鼠SOL形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響1高濃度的健肌I號和健肌N號對廢用所致的大鼠SOL重量減輕與橫截面積CROSSSECTIONALAREA，CSA變小均有明顯的對抗作用；2高濃度的健肌I號和健肌N號均可明顯減輕廢用所致的SOL肌膜溶解中斷、肌原纖維溶解破壞與Z線排列雜亂無序等各種改變。提示高濃度的健肌I號和健?、蛱柧蓪箯U用所致的大鼠SOL萎縮及顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)的改變。其抗肌萎縮作用的機制可能與興奮肌梭有關(guān)。2不同劑量梯度的健肌I號和健?、蛱枌笾ヘ摵纱笫骃OL肌纖維MATPASE活性的影響中、高濃度的健肌I號和健肌N號對廢用所致骨骼肌MATPASE活性升高均有明顯的抑制作用，從而抑制了廢用狀態(tài)下慢縮肌向快縮肌的轉(zhuǎn)化。提示兩種藥物可抑制廢用狀態(tài)下SOL肌纖維代謝的改變，從而對抗或減緩廢用性肌萎縮的發(fā)生發(fā)展。3最佳劑量的健肌I號和健肌N號對后肢去負荷大鼠SOL結(jié)合型泛素表達的影響1結(jié)合型泛素在正常大鼠SOL僅有輕度表達，與正常對照組相比，吊尾3D、7D、14D后，大鼠SOL中結(jié)合型泛素的表達明顯增強，P0001。2在大鼠尾部懸吊3D期間，給予健肌I號和健肌N號后，SOL中結(jié)合型泛素的表達與實驗對照組沒有差異。3在大鼠尾部懸吊7D期間，給予健肌I號和健肌兀號后，SOL結(jié)合型泛素的表達均明顯減弱，陽性細胞的比例明顯低于實驗對照組，P001。4在大鼠尾部懸吊14D期間，給予健肌I號和健肌N號后，給藥組SOL結(jié)合型泛素的表達均明顯弱于實驗對照組，陽性細胞的比例明顯低于實驗對照組，P0001。提示兩種藥物抗肌萎縮作用的機制之一可能是通過抑制骨骼肌中蛋白質(zhì)的分解實現(xiàn)的。4最佳劑量的健肌I號和健肌N號對后肢去負荷大鼠血液流變的影響后肢去負荷14D后，大鼠的全血粘度、血漿粘度、紅細胞血沉、紅細胞壓積、紅細胞剛性指數(shù)明顯增高。給予高濃度的健肌I號和健?、蛱柡螅扯?、血漿粘度、紅細胞血沉、紅細胞壓積、紅細胞剛性指數(shù)的增高得到明顯抑制。提示，II

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文牽張成骨術(shù)修復(fù)犬下頜骨高速投射物傷性骨缺損的實驗研究姓名田磊申請學(xué)位級別博士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學(xué)（頜面外科學(xué)）指導(dǎo)教師周樹夏20050501苧至墾查至堡主蘭垡笙圭?！瘛_____。__。。___。。。。。_。。。?！?。。。___。1’。。’。___。。’’縮略詞表縮略詞英文全稱中文全稱BGCB肝BTCCDHDOFVEPGAP43GBRHAIL_LBL陰LPONOOS．LSPGAPGIPLAPYLLRPS叫SODTCPTGFBTPT2YPLLBIOACTIVEGLASSCERAMICS生物活性玻璃陶瓷BONEMORPHOGENETRICPROTEIN骨形成蛋白BONETRANSPORT骨傳導(dǎo)術(shù)COMPRESSIONDISTRACTION骨壓縮牽引術(shù)DISTRACTIONHISTOGENESIS組織牽張術(shù)DISTRACTIONOSTEOGENESIS牽張成骨FLASHVISUALEVOKEDPOTENTIAL閃光視覺誘發(fā)電位GROWTHASSOCIATEDPROTEIN43生長相關(guān)蛋白GUIDEDBONEREGENERATION引導(dǎo)骨再生HYDROXYAPATITE羥基磷灰石INTERLEUKIN1B自細胞介素LBLACTATEDEHYDROGENASE乳酸脫氫酶LIPIDPEROXIDE脂質(zhì)過氧化物NITRICOXIDE一氧化氮OBSTRUCTIVESLEEPAPNEASYNDROME阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征POLYGLYCOLICACID聚乙醇酸PROSTAGLANDIN前列環(huán)素POLYLACTICACID聚乳酸PRERETIR鯽ENTYEARSOFLIFELOST退休前壽命損失年數(shù)RAPIDPROTOTYPING快速成型SCANNINGELECTRONMICROSCOPE掃描電鏡SUPEROXIDEDISMUTASE超氧化物歧化酶TRIPHOSPTECALCIUM三磷酸鈣TRANSFORMINGGROWTHFACTORB轉(zhuǎn)化生長因子BTESTOSTERONEPROPIONATE丙酸睪丸酮THROMHOXANEA2血栓素A2YEARSOFPOTENTIAL1IRELOST潛在壽命損失年數(shù)

簡介：目的采用兩種改良方法體外分離培養(yǎng)人臍帶血間充質(zhì)干細胞HUCBMSCS，對其進行生物學(xué)鑒定，觀察其與支架材料Β磷酸三鈣ΒTCP的生物相容性，并探討人臍帶血血清HCS對其體外培養(yǎng)擴增的支持作用。方法取28份足月產(chǎn)新生兒臍帶血，以密度梯度離心法分離單個核細胞，接種于含體積分數(shù)01胎牛血清的ΑMEM培養(yǎng)基中，待細胞貼壁之后按兩種改良方法進行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察HUCBMSCS的形態(tài)；流式細胞儀測定細胞免疫表型；進行成骨、成脂及成軟骨誘導(dǎo)并染色；將HUCBMSCS與ΒTCP復(fù)合，掃描電鏡下觀察其在材料表面及內(nèi)部的生長情況；將HUCBMSCS置入含體積分數(shù)01HCS的ΑMEM培養(yǎng)體系中，觀察其生長增殖情況及分化能力。結(jié)果28份臍帶血中13份獲得可穩(wěn)定傳代的成纖維樣細胞Ⅰ組，410；Ⅱ組，918；該細胞可表達間充質(zhì)干細胞表面抗原CD105、CD29，在特定條件下可向成骨細胞、脂肪細胞及軟骨細胞轉(zhuǎn)化；該細胞與ΒTCP復(fù)合后在其表面及內(nèi)部生長、增殖良好；HUCBMSCS可在含HCS的培養(yǎng)液內(nèi)正常生長，傳代5代無明顯形態(tài)改變并在含特定誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基中可向成骨細胞、脂肪細胞分化。結(jié)論臍帶血中存在MSCS，培養(yǎng)方法經(jīng)改良后可提高HUCBMSCS的培養(yǎng)成功率。HUCBMSCS具有多向分化潛能，在特定誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)下，可分化為成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞。HUCBMSCS和ΒTCP生物相容性良好。初步研究發(fā)現(xiàn)人臍帶血血清對HUCBMSCS體外培養(yǎng)擴增具有支持作用。HUCBMSCS可作為一種新的種子細胞用于骨組織工程學(xué)研究。