簡介：目的評價血清天冬氨酸轉氨酶AST與血小板PTL比值APRI在判斷丙氨酸氨基轉移酶及天冬氨酸轉氨酶AST及ALT均在正常檢測范圍上限40UL2倍以下的慢性乙型肝炎病毒HBV感染患者肝臟纖維化程度中的作用發(fā)現潛在抗病毒對象并指導臨床抗病毒治療。方法選擇20102011年在安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院感染病科住院行肝組織病理學檢查的349例臨床診斷慢性HBV感染患者且肝臟穿刺檢查前一周內行肝功能檢查丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸轉氨酶均小于2倍正常檢測范圍上限值即小于80UL。完善常規(guī)實驗室檢查如血常規(guī)、乙肝五項定量雅培、乙肝病毒定量檢測等和肝臟活組織檢查計算出APRI比較不同的肝臟纖維化程度與APRI指數的關系。應用受試者工作特征ROC曲線評價APRI模型在評估肝臟纖維化程度中的臨床診斷及應用價值采用SPEARMAN等級相關分析判斷APRI與肝臟纖維化病理分期的相關性。研究結果1符合標準的慢性乙性肝炎病毒感者349例HBVDNA陽性297例占851％血清HBEAG陽性196例占562。根據肝纖維化分期S0期21例S1期123例S2期96例S3期58例S4期51例。以S2以上為顯著肝纖維化。當APRI≥0273時患者有顯著肝纖維化ROC曲線下面積為0641靈敏度為483特異度為757陽性預測值為739P00001APRI≥0311時患者為肝硬化ROC曲線下面積為0771靈敏度為686特異度為768陰性預測值為935P00001。2在HBVDNA為1103～1105拷貝ML組中APRI≥0179為明顯肝纖維化最優(yōu)截點APRI≥0283為肝硬化最優(yōu)截點在HBVDNA為1106～1108拷貝ML組中APRI≥0275為明顯肝纖維化最優(yōu)截點APRI≥0326為肝硬化最優(yōu)截點。3HBEAG陽性的慢性乙型肝炎病毒感染的病例中APRI≥0283為明顯肝纖維化最優(yōu)截點APRI≥0287為肝硬化最優(yōu)截點HBEAG陰性的慢性乙性肝炎病毒感染的病例中APRI≥0179為明顯肝纖維化最優(yōu)截點APRI≥0349為肝硬化最優(yōu)截點4在297例HBVDNA陽性病例中APRI≥0273為明顯肝纖維化最優(yōu)截點APRI≥0311為肝硬化最優(yōu)截點在52例HBVDNA陰性病例中APRI≥0153為明顯肝纖維化最優(yōu)截點APRI≥0258為肝硬化最優(yōu)截點。5SPEARMAN相關分析顯示APRI與肝纖維化分期呈顯著正相關性R0370P結論APRI可用于丙氨酸氨基轉移酶及天冬氨酸轉氨酶均在正常值上限2倍以下的慢性HBV感染患者肝纖維化程度的判斷APRI≥0273時為有明顯肝纖維化纖維化病理分級在S2及以上739符合病理分級對臨床選擇抗病毒治療的時機具有一定指導意義。若APRI指數不超過0311則935的轉氨酶正常值上限2倍以下的慢性乙性肝炎病毒感染者可排除已進展為肝炎肝硬化。根據HBVDNA水平不同制定相應的APRI指數評價肝纖維化程度可提高臨床應用價值。

簡介：【目的】研究人乳頭瘤病毒（HPV）相關疾病中HPV亞型分布，HPV16的E2、E6、E7基因突變和E6、E7抗原表達，及其與疾病臨床特征間的相關性。【方法】1、標本收集收集廈門大學附屬中山醫(yī)院病理科20072013年HPV相關疾病的庫存石蠟包埋組織共91例，包括31例尖銳濕疣（CA）、11例2級宮頸上皮內瘤變（CIN2）、23例3級宮頸上皮內瘤變（CIN3）、3例鮑溫樣丘疹?。˙P）、9例鮑溫?。˙D）和14例派吉特病（PD）。2、從福爾馬林固定石蠟包埋組織中提取HPV基因組DNA，用PCR膜雜交法檢測HPVDNA并做HPV分型。3、應用DNA測序法測定HPV16的E2、E6和E7基因序列，并應用BLAST軟件將測序結果與基因庫中野生型HPV16序列（GENEBANKNC001526）比對，以分析HPV16的E2、E6和E7基因突變。4、應用免疫組織化學SP法檢測HPV16的E6和E7抗原表達。5、分析HPV相關疾病中HPV亞型分布、HPV16的E2、E6和E7基因突變、HPV16的E6和E7抗原表達與疾病臨床特征（性別、年齡、部位、組織病理特征等）間相關性。6、統(tǒng)計學分析HPVDNA檢出率差異比較采用X2檢驗，設P【結果】1、HPV分型91例標本中檢出10個HPV亞型，其中1431例CA（452％）、511例CIN2（455）、1423例CIN3（609）和19例BD（111）中檢出HRHPVDNA，331例CA（97）、211例CIN2（182）、823例CIN3（348）和19例BD（111）中檢出HPV16DNA，但14例PD和3例BP中未檢出HPVDNA，所有標本中都未檢出HPV18DNA。男性CA患者檢出HPV均為LRHPV，但女性CA患者檢出LRHPV和HRHPV混合感染。女性CA患者HRHPV檢出部位主要為宮頸，且年齡50歲組HRHPV檢出率高于年齡2、HPV16的E2、E6和E7基因突變1例CA和1例CIN3中檢出HPV16的E2基因置換突變，2例CIN3中檢出HPV16的E2、E6和E7基因置換突變。HPV16的E2基因中共檢出10個堿基置換突變G2827A（ASP→ASN）、C3158A（THR→LYS）、G3248A（ARG→GLN）、T3383C（ILE→THR）、C3409T（PRO→SER）、G3448A（GLU→LYS）、C3683A（THR→LYS）和C3786A（ASP→GLN）為錯義突變；HPV16E6基因中共檢出5個堿基置換突變，其中G94A置換突變位于起始密碼子之前導致一個調控氨基酸改變，G132T（ARG→ILE）、T178A（ASP→GLU）、T178G（ASP→GLU）和C278G（PRO→ALA）為錯義突變，T178A（ASP→GLU）和T178G（ASP→GLU）突變后編碼的氨基酸相同；HPV16的E7基因中共檢出4個堿基置換突變，其中A647G（ASN→SER）為錯義突變。3、HPV16的E6和E7抗原表達14例HPV16DNA陽性標本中1例BD、1例CA、1例CIN2和3例CIN3呈HPV16E6抗原陽性，1例BD和3例CIN3呈HPV16E7抗原陽性?！窘Y論】1、女性CA中存在LRHPV和HRHPV混合感染，HRHPV檢出部位主要為宮頸。2、CIN中檢出的HRHPV主要為HPV16。3、發(fā)現CA中存在HPV16E2基因突變。4、HPV16E2、E6和E7基因置換突變可能與CA、CIN2和CIN3的發(fā)生和進展有關。5、HPV16E7抗原只在癌前病變或原位癌中檢出，因此可能作為疾病惡性指標之一。6、PD可能與所檢測HPV亞型無關。

簡介：研究生姓名研究生姓名徐妍遵義醫(yī)學院碩士學位論文遵義醫(yī)學院碩士學位論文中圖法分類號100104學校代碼10661學號2011059密級碩士學位論文碩士學位論文（學術型學位）EB病毒陽性的彌漫性大病毒陽性的彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞淋巴瘤臨床病理學研究臨床病理學研究（ACLINICOPATHOLOGICALSTUDYOFEBVPOSITIVEDIFFUSELARGEBCELLLYMPHOMA）姓名名徐妍專業(yè)業(yè)病理學與病理生理學病理學與病理生理學研究方向研究方向淋巴造血組織腫瘤淋巴造血組織腫瘤導師師徐鋼教授教授培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位遵義醫(yī)學院遵義醫(yī)學院2014年5月研究生姓名研究生姓名徐妍遵義醫(yī)學院碩士學位論文遵義醫(yī)學院碩士學位論文目錄1論文EB病毒陽性的彌漫性大B細胞淋巴瘤臨床病理學研究1中英縮略詞對照表1中文摘要2英文摘要5前言8材料和方法9結果17討論37結論43參考文獻452綜述503致謝664作者簡介67基金課題編號四川省衛(wèi)生廳科研基金資助項目（編號100510）

簡介：目的了解輪狀病毒感染膽管上皮細胞對HMGB1MRNA表達及蛋白釋放的影響。方法1體外培養(yǎng)小鼠膽管上皮細胞，設立對照組和實驗組，實驗組接種輪狀病毒，對照組接種等量病毒培養(yǎng)液，24小時后免疫組化分析HMGB1表達。2體外培養(yǎng)小鼠膽管上皮細胞，設對照組、病毒組、SIRNA組，分別于12H、24H、36H、48H收集細胞和培養(yǎng)上清，RTPCR及ELISA分別檢測膽管上皮細胞HMGB1MRNA表達及培養(yǎng)上清蛋白表達。結果1HMGB1存在于正常膽管上皮細胞的胞核。2病毒感染后胞核HMGB1含量較正常明顯下降。312H、24H膽管上皮細胞HMGB1MRNA表達病毒組表達較對照組升高（P436H、48H細胞培養(yǎng)上清HMGB1濃度病毒組HMGB1蛋白濃度較對照組顯著升高（P結論1輪狀病毒感染能引起膽管上皮細胞HMGB1MRNA表達上調及胞外HMGB1蛋白濃度升高。2SIRNA干擾能有效抑制病毒感染引起的胞外HMGB1蛋白水平。

簡介：目的觀察依托咪酯持續(xù)輸注在腹腔鏡膽囊切除術中的應用及其對患者術后認知功能的影響。方法139例行擇期行腹腔鏡膽囊切除術LAPAROSCOPICCHOLECYSTECTOMYLC患者ASAⅠⅡ級年齡2280歲排除術前有認知功能障礙手術相關病史神經、精神系統(tǒng)疾病史或者服用相應藥物史聽力和語言障礙顱腦疾患病史術后送入重癥監(jiān)護病房INTENSIVECAREUNITICU者患者拒絕或家屬不配合做調查者。記錄術前指標年齡、性別、民族、體重、文化程度、ASA分級家庭住址和聯(lián)系電話。術前均常規(guī)準備麻醉維持隨機分為兩組依托咪酯組E組N68異丙酚組P組N71。記錄指標入室時T0、誘導前T1、插管后T2、手術開始T3、手術5MINT4、手術10MINT5、手術30MINT6以及手術結束時T7各時間點平均動脈壓MAP、心率HR、脈搏血氧飽和度SPO2、呼吸末二氧化碳分壓PETCO2、麻醉時間、手術時間、術中出血量、液體輸入量、術后睜眼時間以及拔管時間。認知功能評估通過簡易精神狀態(tài)量表MINIMENTALSTATEEXAMINATIONMMSE評分總分為30分術后評分與術前評分比較若下降2分或2分以上判斷為認知功能障礙檢測并記錄所有患者在術前1D、術后第1D、第3D、第7D測定患者的定向力、注意和計算力、識記能力、語言能力、回憶能力的評分。結果共有139例完成隨訪。1兩組患者術后第1D均有POCD發(fā)生其中依托咪酯組7例104％異丙酚組8例105兩組組間比較無統(tǒng)計學差異P005術后第3D依托咪酯組6例89異丙酚組5例65兩組組間比較無統(tǒng)計學差異P005術后第7D依托咪酯組發(fā)生1例14異丙酚組無發(fā)生兩組組間比較無統(tǒng)計學差異P005。兩組術后1周累計發(fā)生率依托咪酯組12例179丙泊酚組11例154兩組總發(fā)生率比較無統(tǒng)計學差異P005。2影響因素分層分析顯示異丙酚組年齡P0298、性別P0083、民族P0169、文化程度P0556、麻醉時間P0412、手術時間P0506無統(tǒng)計學差異P005。依托咪酯E組年齡P0347、性別P1000、民族P1000、麻醉時間P0410、手術時間P0110無統(tǒng)計學差異P005依托咪酯組文化程度P0021是影響早期POCD發(fā)生的危險因素。結論1、依托咪酯持續(xù)輸注用于腹腔鏡膽囊切除術麻醉維持與異丙酚具有相同的效果均能保證術中患者生命體征各項指標平穩(wěn)順利完成手術。2、依托咪酯用于短小手術麻醉維持不會增加患者POCD的發(fā)生率。

簡介：分類號R71密級公開UDC碩士學位論文攜帶CRTHPV18E2基因的腺病毒包裝及其在宮頸癌CASKI細胞中的表達學位申請人羅飛學科專業(yè)婦產科學指導教師李志英主任醫(yī)師柳長柏教授二○一二年五月三峽大學碩士學位論文三峽大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果，除文中已經注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體均已在文中以明確方式標明，本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。學位論文作者簽名日期三峽大學研究生知識產權承諾書本人承認我作為三峽大學碩士研究生在校學習期間，在導師指導下，依據研究工作所作學位論文的知識產權全部權歸三峽大學所有。本人承諾我有義務維護三峽大學的知識產權，凡是以我本人學位論文內的全部或部分研究成果，或實驗數據為基礎所形成的研究論文及成果，無論是以何種形式刊發(fā)學術論文、進行成果鑒定或申報獎勵，均以三峽大學為第一作者單位或完成單位，并事先征得導師或學校相關部門的同意。我愿承擔因違背上述承諾而引起的一切法津和經濟后果。學位論文作者簽名日期I

簡介：獲得性免疫缺陷綜合征（ACQUIREDIMMUNODEFICIENCYSYNDROME，AIDS）已成為嚴重危害人類健康的傳染病之一。目前，高效抗逆轉錄病毒治療（HIGHLYACTIVEANTIRETROVIRALTHERAPYHAART）雖然能大大降低AIDS的發(fā)病率和死亡率，有效抑制患者體內病毒復制，卻不能徹底清除細胞內特別是潛伏感染儲存庫中的人免疫缺陷病毒1型（HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS1，HIV1）。HIV1潛伏感染已成為治愈AIDS的巨大障礙。載脂蛋白BMRNA編輯酶催化多肽家族（APOLIPOPROTEINBMRNAEDITINGENZYMECATALYTICPOLYPEPTIDE，APOBEC）的發(fā)現，使得人們對于固有免疫系統(tǒng)抑制HIV1的重要作用有了新的認識。APOBEC家族包括11個成員，分別是APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3AH、APOBEC4以及活化誘導脫氨基酶（ACTIVATIONINDUCEDDEAMINASE，AID。多數家族成員能夠在DNA或RNA水平上突變病毒，從而抑制多種逆轉錄病毒復制，例如HIV1、鼠白血病病毒、馬傳染性貧血病毒，其中APOBEC3G（A3G）和APOBEC3FA3F的抗HIV1作用最受關注。靜止初始CD4T細胞是HIV1潛伏感染的主要儲存庫。研究發(fā)現，雖然A3GF能夠抑制靜止初始CD4＋T淋巴細胞中HIV1的復制，但這種天然屏障似乎不夠強大。HIV1病毒感染因子（VIRIONINFECTIVITYFACT，VIF可以通過蛋白酶降解途徑阻止A3GF整合入病毒顆粒，從而拮抗其抗病毒作用。較前研究顯示增加細胞內A3GF的表達量可以有效抑制VIF的拮抗。KEYANGCHEN等發(fā)現IFNΑ通過經典的JAKSTAT信號轉導通路增強人初始CD4T細胞中A3G的表達量。家族另一成員A3F，被認為在組織分布和氨基酸序列上與A3G最接近，而且A3F較A3G具有更強地抑制HIV1整合和前病毒形成的能力。但IFNΑ是否介導人初始CD4T細胞中A3F表達及相關機制，至今未有研究。因此，本課題觀察了IFNΑ對初始CD4T細胞A3F轉錄活性、蛋白表達的影響，并初步探討其機制，為利用A3F清除潛伏庫中HIV1提供實驗基礎。主要研究內容和結果如下1、免疫磁珠法分離出人初始CD4T淋巴細胞，用實時定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（QUANTITATIVEREVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTION，QRTPCR）檢測IFN?。?000UL）刺激不同時間后，人初始CD4T淋巴細胞內A3F轉錄水平的變化。結果發(fā)現刺激3H、5H、7H的轉錄水平顯著高于0H（P2、WESTERNBLOT法檢測IFNΑ刺激（1000UL）對人初始CD4T淋巴細胞A3F蛋白表達的影響。發(fā)現IFNΑ可以上調人初始CD4T細胞中A3F蛋白的表達。3、用5′CDNA末端快速擴增技術（5′RAPIDAMPLIFICATIONOFCDNAENDS，5RACE）確認A3F轉錄起始位點。結果顯示可能的轉錄起始位點位（TRANIONALSTARTSITES，TSS于GENBANK公布的A3FCDNA起始位置上游13個核苷酸（NUCLEOTIDE，NT）處。4、選擇人基因組DNA為模板，采用高保真TAQ酶行PCR法，擴增出大小1485BP的A3F啟動子，相對TSS位置為147213BP。5、構建含A3F啟動子的PGL3A3FPROM重組質粒，并以此重組質粒為模板，采用以PCR為基礎的定點突變技術，擴增出突變重組質粒（GTTTCACTTCTT突變成ATCGATCGATCG）。6、用PGL3A3FPROM重組質粒、突變質粒以及PGL3BASIC質粒（陰性對照組）轉染293T細胞，采用雙熒光素酶基因報告系統(tǒng)觀察IFNΑ對A3F啟動子活性的影響。發(fā)現IFNΑ能夠增強A3F啟動子活性（P綜上所述，通過本研究證實IFNΑ能夠上調人初始CD4T細胞中A3F表達，并且初步認為是通過作用于A3F啟動子干擾素刺激應答元件（IFNSTIMULATEDRESPONSEELEMENT，ISRE）來實現的，為深層次研究信號轉導機制打下基礎，并為利用A3F抑制潛伏庫中HIV1復制提供新的方法和思路，為IFNΑ聯(lián)合HAART治療提供理論依據。

簡介：點擊查看更多老年人失眠與輕度認知功能障礙的臨床研究.pdf精彩內容。

簡介：點擊查看更多認知與情緒相互作用的神經與免疫學研究.pdf精彩內容。

簡介：點擊查看更多蟲草治肝片治療慢性乙型病毒性肝炎(毒熱未清,氣陰兩虛證)的臨床研究.pdf精彩內容。

簡介：IL33INTELEUKIN33IL33作為IL1家族的一員與其特異性受體ST2結合參與固有免疫和獲得性免疫。IL33主要通過促進TH2細胞免疫反應在自身免疫疾病、變態(tài)反應性疾病、心血管疾病和神經退行性疾病等的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASESCOPD是一組以肺實質與小氣道受到病理損害后導致慢性不可逆性氣道阻塞、呼氣阻力增加、肺功能不全為共同特點的肺疾病的總稱。吸煙是COPD發(fā)病的重要因素。為了研究IL33下調對相關炎癥反應的影響本研究應用RNA干擾技術RNAINTERFERENCERNAI特異性下調小鼠IL33MRNA和蛋白的表達探討IL33下調在吸煙誘導的小鼠急性肺炎模型中的作用。研究內容如下一、根據GENBANK中小鼠IL33MRNA序列AY905582按照RNA干擾序列設計原則運用GEN公司的SIRNADESIGNCENTERSIRNATARGETFINDER設計針對小鼠IL33的小干擾RNASMALLINTEFERENCERNASIRNA同時加入酶切位點XHOI和MLUI由上海生工生物工程有限公司合成編碼SIRNA序列的DNA單鏈。二、運用基因克隆技術將化學合成的靶向小鼠IL33基因的短發(fā)卡RNASMALLHAIRPINRNASHRNA與逆轉錄病毒載體PRNATINH14RETRO連接。經測序鑒定重組載體中插入的SHRNA序列和設計序列一致證明我們成功構建了小鼠IL33RNAI逆轉錄病毒載體?？漳孓D錄病毒載體作為陰性對照經脂質體LIPOFECTAMINE2000轉染病毒包裝細胞PT67并以潮霉素BHYGROMYCINB篩選得到穩(wěn)定轉染細胞系收集、保存病毒上清。三、收集的病毒上清經尾靜脈注射作用于實驗小鼠。應用反轉錄聚合酶鏈反應技術REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR檢測IL33MRNAMESSENGERRNAMRNA在肺組織的表達應用免疫組織化學技術IMMUNOHISTOCHEMISTRYIHC檢測IL33蛋白的表達。RTPCR和免疫組織化學法結果顯示我們構建的重組逆轉錄病毒載體PRNATINH14IL33A和33B均可有效沉默小鼠肺組織中IL33MRNA和蛋白的表達并且RTPCR結果顯示PRNATINH14IL33A的沉默效果更為顯著為以后研究IL33在相關疾病中的作用提供了可行方法。HE染色結果顯示IL33干擾處理組的小鼠肺組織炎癥病理改變有所減輕為研究IL33在COPD中的作用提供了有用的實驗證據?？傊诒狙芯恐形覀兂晒嫿酸槍π∈驣L33的RNAI逆轉錄病毒表達載體轉染病毒包裝細胞PT67并篩選獲得穩(wěn)定轉染細胞系經動物實驗證實設計的SHRNA具有明顯的沉默效果并對小鼠肺部炎癥有一定的治療作用為IL33的理論基礎和臨床應用的進一步研究奠定了基礎。

簡介：背景與目的乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球性的嚴重公共衛(wèi)生問題，是嚴重危害人類健康的重要傳染病之一。依托國家“十一五”傳染病重大專項，進一步完善中國HBV耐藥監(jiān)測網絡平臺，從平臺對中國慢性乙型肝炎乙肝及乙肝后肝硬化患者核苷（酸）類藥物治療耐藥情況進行監(jiān)測和分析。研究方法第一部分采用網絡信息與生物信息技術，建立并初步完善中國乙肝病毒（HBV）耐藥網絡監(jiān)測平臺，分析當前HBV逆轉錄酶RT區(qū)耐藥相關基因突變的特點及耐藥現狀。第二部分抽提HBV感染者外周血血清HBVDNA，PCR分三段擴增HBVRT區(qū)后構建片段化DNA文庫，分別采用454和SANGER測序法測定DNA序列。對結果數據進行處理后利用生物信息學軟件進行比較分析。主要結果第一部分建立了目前國內覆蓋面最廣的大型HBV基因多功能共享數據庫。截止2012年12月份為止，已對9998例乙肝患者進行了基因耐藥檢測，其中基因型明確的患者有7551例，B基因型為2421例，占3206％（24217551），C基因型為5088例，占6738（50887551），D基因型患者為42例，占056（427551）。在檢測到原發(fā)性耐藥相關位點突變及代償性突變5207例52297551，6896）患者中，C基因型占3700例（370050887272），B基因型占1482例（14822421，6121），C基因型的構成比明顯高于B基因型P結論為實現對乙肝患者耐藥數據的實時監(jiān)控、共享和標準化，本研究建立了我國HBV耐藥監(jiān)測網絡平臺。目前國內HBV基因突變及其導致的核苷（酸）藥耐藥現狀值得關注。在耐藥相關變異的檢測方法上，超深度測序較SANGER測序具有更好的敏感性，適用于低豐度病毒變異的檢測及準種的分析。

簡介：目的通過構建雙質粒表達系統(tǒng)和單質粒表達系統(tǒng)兩種原核表達系統(tǒng)，并通過應用19MER莖環(huán)結構的C變異體和在目的序列中增加包裝位點的數量，探討構建內含大片段嵌合體RNA的耐核糖核酸酶RIBONUCLEASE，RNASE病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLES，VLPS的可能性。方法雙質粒系統(tǒng)表達內含長片段嵌合體RNA的耐核糖核酸酶的VLPS首先設計含BAMHI和HINDIII酶切位點的引物，擴增MS2噬菌體的編碼成熟酶蛋白和衣殼蛋白的1，700BP序列，BAMHI和HINDIII酶切后，與用同樣酶切的表達載體PET28B相連接，得到重組載體PETMC。應用重疊延伸PCR技術擴增3種病毒的6段嵌合體序列，在設計引物時，使嵌合體兩端含有FSEI和PACI酶切位點，FSEI和PACI酶切后，與用同樣酶切的表達載體PACYCDUET1相連接，得到重組載體PACYC3V。將雙質粒共轉化入表達菌株BL21DE3，通過誘導進行表達，將表達后的VLPS純化。應用RTPCR驗證VLPS是否包裝了全長的RNA片段。然后進行VLPS的穩(wěn)定性試驗和應用HCVRNA國際標準品定值含有嵌合體RNA的VLPS。單質粒系統(tǒng)表達耐RNASE內含長片段嵌合體RNA的VLPS擴增MS2噬菌體的編碼成熟酶蛋白和衣殼蛋白的1，700BP序列，并將原來的19MER的包裝位點序列改變?yōu)镃變異體，酶切后，與用同樣酶切的表達載體PET28B相連接，得到重組載體PETMS2C。應用重疊PCR擴增3種病毒的5段嵌合體序列3VFIVE，包括3段SARSCOV基因、一段HCV基因和一段H5N1基因，并在SABSCOV3和HCV序列之間插入一個19MER的變異體包裝位點序列，在設計引物時，使嵌合體兩端含有NOTI酶切位點，與NOTI酶切的重組載體PETMS2C相連接，構建得到表達載體PETMS23V。同時構建三種對照組表達載體NP3VPETP、NP3VPETC和P3VPETP。通過誘導進行表達。最后分別測定NP3VPETP、NP3VPETC、P3VPETP和PETMS23V4種表達產物的260NM吸光度值A260，根據公式LA2600125MGML計算4種表達產物的表達效率。結果雙質粒系統(tǒng)表達內含長片段嵌合體RNA的耐RNASE的VLPS成功構建了兩種原核表達載體PETMC和PACYC3V。經原核表達后得到含全長為2248NT的三種病毒6段嵌合體RNA的VLPS所包裝的RNA具有耐RNASE和脫氧核糖核酸酶DEOXYRIBONULCEASE，DNASE消化的特性以及良好的不同溫度條件下的穩(wěn)定性。VLPS五個濃度106、105、104、103和102COPIESML與國際標準物質的溯源定值結果分別是1354107IUML、5740105IUML、6580104IUML、5428103IUML和9613102IUML。單質粒系統(tǒng)表達耐RNASE內含長片段嵌合體RNA的VLPS成功構建了4種原核表達載體PETMS23V、P3VPETP、NP3VPETP和NP3VPETC。PETMS23V和P3VPETP經原核表達后得到含全長為1891NT的5段嵌合體RNA的VLPS；NP3VPETP、NP3VPETC其原核表達產物VLPS中僅包裝了1200NT的目的嵌合體RNA。NP3VPETP、NP3VPETC、P3VPETP和PETMS23V的表達效率分別為023、035、035和051MGML。NP3VPETC比NP3VPETP表達效率高52％，而PETMS23V比P3VPETP表達效率高38％。結論我們構建的表達載體及原核表達系統(tǒng)，可作為構建和制備耐RNASE的含三種病毒嵌合體序列的VLPS的平臺，這種VLPS可以作為對同一個標本進行多個病毒的同時檢測時可應用的多靶核酸標準品和質控品，既節(jié)省了成本，也簡化了操作程序。同時也解決了其它無國際標準品RNA病毒檢測的溯源問題。

簡介：目的觀察中醫(yī)藥治療小兒偏肺病毒、博卡病毒肺炎的臨床療效，并對其安全性進行評價，為臨床提供循證醫(yī)學證據。方法按照隨機、平行對照原則，選取江蘇省中醫(yī)院兒科病房中醫(yī)診斷為肺炎喘嗽風熱閉肺證或痰熱閉肺證，西醫(yī)診斷為小兒病毒性肺炎的患兒，采用實時熒光PCR法檢測鼻咽分泌物脫落細胞中偏肺病毒、博卡病毒的特異性基因片段，陽性者納入觀察病例，使用區(qū)組隨機法分為治療組和對照組。治療組給予清肺口服液口服，喜炎平注射液靜滴對照組給予氨溴特羅口服液（易坦靜）口服，利巴韋林注射液靜滴，療程10天。比較治療后兩組患兒的主癥積分、次癥積分、綜合療效等，并記錄不良事件，對其安全性作出評價。結果本次研究共收集病例61例，因對照組脫落2例，實際統(tǒng)計59例，其中治療組31例、對照組28例。治療組痊愈8例2581％、顯效19例6129％、進步4例1290％、無效0例0％，總有效率100％對照組痊愈1例357％、顯效15例5357％、進步11例3929％、無效1例357％，總有效率9643％。兩組療效經卡方檢驗，X29857，P00017，有高度統(tǒng)計學意義（P＜001），治療組療效顯著優(yōu)于對照組。治療后兩組主癥總積分、次癥總積分比較，治療組積分均低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜001）。治療后癥狀、體征咳嗽、食欲、舌象改善治療組均顯著優(yōu)于對照組P＜001痰鳴、X線胸片改善治療組優(yōu)于對照組（P＜005）發(fā)熱、惡寒、氣喘、肺部聽診、心率、紫紺、面色、精神、惡心嘔吐、出汗、口渴、鼻咽分泌物病毒檢測，兩組比較無統(tǒng)計學意義（P＞005）。臨床安全性研究結果治療組臨床未出現不良反應，對照組2例出現過敏反應，其中1例脫落，余未見不良反應，兩組安全性比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞005）。結論中醫(yī)藥治療小兒偏肺病毒、博卡病毒肺炎是安全有效的。

簡介：溫州醫(yī)科大學碩士學位論文論文題目北京與上海ARI患兒中小RNA病毒和人冠狀病毒分型檢測答辯委員會主席王成彬教授解放軍總醫(yī)院答辯委員會成員高基民教授溫州醫(yī)科大學張泓泰副研究員中國科學院生物物理研究所論文答辯日期2015年5月18日溫州醫(yī)科大學碩士學位論文