mTOR-p70S6K信號通路在小兒血管瘤演變中的作用.pdf

1、目的：探討mTOR/p70S6K信號通路在小兒血管瘤的發(fā)生、發(fā)展及消退過程中的作用。
　　 方法：
　　 1.收集遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院2005年-2009年未經其他治療、單純行手術切除并經病理診斷為血管瘤的標本31例，結合Mulliken分類法與增殖細胞核抗原（PCNA）表達對血管瘤進行分類和分期，免疫組化檢測并比較增生期血管瘤和消退期血管瘤組織中mTOR、p70S6K-α的表達水平。
　　 2.用組織塊法培養(yǎng)血管

2、瘤內皮細胞，待長成單層細胞以后傳代，建立血管瘤血管內皮細胞系，觀察其增殖特征，并用第Ⅷ凝血因子相關抗原進行鑒定。同步化培養(yǎng)血管瘤內皮細胞，采用Western blot法檢測血管瘤內皮細胞mTOR、p70S6K-α的表達水平，同期用流式細胞儀檢測血管瘤血管內皮細胞周期的變化；并分析mTOR、p70S6K-α的表達水平與血管瘤血管內皮細胞周期的分布及細胞凋亡的相關性。
　　 3.待細胞處于對數(shù)生長期，換無血清培養(yǎng)液孵育48h使細胞同

3、步化，然后分別加入O，雷帕霉素10nmol/L，繼續(xù)孵育24h，細胞刮刀收集細胞，檢測血管瘤內皮細胞mTOR、p70S6K-α的表達水平，同時檢測血管瘤血管內皮細胞周期的分布。
　　 結果：
　　 1.18例增殖期血管瘤mTOR、p70S6K-α的積分光密度分別為6336.48±1655.89，588.72±223.87；13例消退期血管瘤mTOR、p70S6K-α的積分光密度分別為846.22±297.09，3235.

4、64±947.77；血管瘤增殖期p70S6K-α的積分光密度明顯低于消退期，差異有顯著性（P<0.01）；血管瘤增殖期mTOR.的積分光密度明顯高于消退期，差異有顯著性（P<0.01）。
　　 2.培養(yǎng)的血管瘤內皮細胞于4天后開始貼壁生長，一周后只有少量細胞鋪展貼壁生長，兩周后開始生長分裂，三周后細胞殲始快速生長，四周后細胞鋪滿板底。用相差倒置顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)所分離的內皮細胞呈上皮細胞形態(tài)。培養(yǎng)細胞第Ⅷ凝血因子相關抗原表達為陽性

5、。
　　 3.mTOR蛋白表達水平較高，p70S6K-α蛋白表達水平較低時，處于G0/G1期的細胞較少（55.95±4.38）％；mTOR蛋白表達水平下降，p70S6K-α蛋白表達水平升高，處于Go/G1期的細胞明顯增多（77.86±8.18）％。
　　 4.雷帕霉素作用于體外培養(yǎng)血管瘤血管內皮細胞24小時后，細胞周期變阻滯在G1期，雷帕霉素作用前后差異具有顯著性（P<0.01）；mTOR蛋白表達水平下降（P<0.01）

6、；p70S6K-α蛋白表達水平升高（P<0.01）。
　　 結論：
　　 1.在血管瘤增生期mTOR高表達可能導致p70S6K-α的活化磷酸化，促進血管瘤血管內皮細胞由G0/G1進入S期，血管瘤呈快速增殖狀態(tài)。而在血管瘤消退期，在某種機制作用下，mTOR表達減少，抑制了p70S6K-α的磷酸化，使細胞周期阻滯在G0/G1期，進而促進血管瘤血管內皮細胞凋亡，血管瘤表現(xiàn)出自然消退的趨向。
　　 2.體外培養(yǎng)的血管瘤內