多糖的提取分離方法

1、1.多糖的提取方法多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、動物多糖3大類。多糖的提取首先要根據多糖的存在形式及提取部位，決定在提取之前是否做預處理。動物多糖和微生物多糖多有脂質包圍，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液進行回流脫脂，釋放多糖。植物多糖提取時需注意一些含脂較高的根、莖、葉、花、果及種子類，在提取前，應先用低極性的有機溶劑對原料進行脫脂預處理，目前多糖的提取方法主要有溶劑提取法、生物提取法、強化提取法

2、等。11溶劑法溶劑法111水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一種方法。多糖是極性大分子化合物，提取時應選擇水、醇等極性強的溶劑。用水作溶劑來提取多糖時，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提滲濾，然后將提取液濃縮后，在濃縮液中加乙醇，使其最終體積分數(shù)達到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性質，使多糖從提取液中沉淀出來，室溫靜置5h，多糖的質量分數(shù)和得率均較高。影響多糖提取率的因素有：水的用量、提取溫度、浸提固液比、提取時間以及提取次數(shù)等

3、。水提醇沉法提取多糖不需特殊設備，生產工藝成本低，安全，適合工業(yè)化大生產，是一種可取的提取方法。但由于水的極性大，容易把蛋白質、苷類等水溶性的成分浸提出來，從而使提取液存放時腐敗變質，為后續(xù)的分離帶來困難，且該法提取比較耗時，提取率也不高。112酸提法為了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基礎上發(fā)展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基團的多糖在較低pH值下難以溶解，可用乙酸或鹽酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入銅鹽等生成

4、不溶性絡合物或鹽類沉淀而析出。由于H＋的存在抑制了酸性雜質的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖產品純度相對較高，但在酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂，且酸會對容器造成腐蝕，除弱酸外，一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之處。113堿提法多糖在堿性溶液中穩(wěn)定，堿有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，縮短提取時間，但提取液中含有其它雜質，使粘度過大，過濾困難，且浸提液有較濃的堿味，溶液顏色呈黃色，這樣會影響成品的風味和色澤。114超臨

5、界流體萃取法超臨界流體萃取技術是近年來發(fā)展起來的一種新的提取分離技術。超臨界流體是指物質處于臨界溫度和臨界壓力以上時的狀態(tài)，這種流體兼有液體和氣體的特點，密度大，粘稠度小，有極高的溶解，滲透到提取材料的基質中，發(fā)揮非常有效的萃取功能。而且這種溶解能力隨著壓力的升高而增大，提取結束后，再通過減壓將其釋放出來，具有保持有效成分的活性和無溶劑殘留等優(yōu)點。由于CO2的超臨界條件（TC＝3046℃，Tp＝738MPa）容易達到，常用于超臨界萃取的

6、溶劑，在壓力為8～40MPa時的超臨界CO2足以溶解任何非極性、中極性化合物，在加入改性劑后則可溶解極性化物。該法的缺點是設備復雜，運行成本高，提取范圍有限。12酶解法酶解法121單一酶解法單一酶解法指的是使用一種酶來提取多糖，從而提高提取率的生物技術。其中經常使用的酶有蛋白酶、纖維素酶等。蛋白酶對植物細胞中游離的蛋白質具有分解作用，使其結高，但溶劑沸點低，易揮發(fā)，不宜大量應用。213三氯乙酸法三氯乙酸是一種有機酸，使多糖提取液中的蛋白

7、質與有機酸作用而變性沉淀。該法是在多糖水提液中滴加5%～10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸，混勻靜置過夜，離心除去膠狀沉淀，重復以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止，得無蛋白質的多糖。三氯乙酸濃度越大，除蛋白質效果越好，但對多糖的影響也越大，可能是三氯乙酸對多糖結構具有破壞作用，使多糖降解，而且這種破壞作用隨著三氯乙酸濃度增大而增強。植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白質，也可先用蛋白水解酶，使樣品中的蛋白質部分降解后再用Sevag法效果更好

8、；微生物多糖去除蛋白常采用Sevag法、三氟三氯乙烷法；也可用鹽析法、有機溶劑萃取等方法除蛋白。22多糖的分離多糖的分離主要有分級沉淀、季銨鹽沉淀法、金屬鹽沉淀法、色譜分離、膜分離、透析、電滲析等，目前大多采用DEAE－凝膠或其他各種不同類型的凝膠柱層析以及離子交換色譜法。221分級沉淀法大多數(shù)活性多糖可溶于水，3個碳以下的多糖還可溶于乙醇，隨著聚合度的增大，多糖在乙醇中的溶解度逐漸降低。根據這一性質可在多糖的濃縮水溶液中分批加入乙醇，

9、使乙醇的體積濃度逐漸增加到50，100，200，900mLL，從而使不同聚合度的多糖分別沉淀析出。222色譜分離法常用兩種色譜分離方法：一是凝膠柱色譜法，二是離子交換色譜法。223膜分離法膜分離技術（membraneseparationtechnology，MST）是一種高效分離技術，分離過程以選擇透過性膜作為分離介質，通過在膜兩側施加某種推動力（壓力差、化學位差、電位差等），使原料液中組分有選擇性的通過膜。目前應用較多的是超濾和微濾技

10、術。3多糖的分析鑒定多糖的分析鑒定31含量的測定含量的測定測定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、紙色譜法、離子交換色譜法、yaphe法、薄層色譜法、酶法、原子吸收法、HPLC法、凝膠電泳法、親和電泳法、連續(xù)流動分析法檢測法[44]、次亞碘酸鹽定量法、蒽酮－硫酸法（總糖）、DNS法（還原法）、磷鉬比色法、鄰鉀苯胺比色法等。每種方法只對某些多糖的測量效果好。比色法、分光光度法、離子交換色譜法、酶法和電泳法等可同時用于

11、多糖的定性定量分析。32純度鑒定純度鑒定多糖是高分子化合物，其純品微觀上是不均一的，通常所說的多糖純品實質上是一定分子量范圍的均一組分。多糖純度鑒定的常用方法：超離心、高壓電泳、凝膠層析、HLPC法等?，F(xiàn)在應用較多的是HLPC法，旋光度測定也是純度測定的一種方法。33分子量的測定分子量的測定多糖分子量的測定是研究多糖性質的一項重要工作。常用方法：滲透壓法、蒸氣壓滲透劑法、端基法、粘度法、光散射法、凝膠色譜法、超過率法、沉淀法、凝膠電泳法