浙江地區(qū)人巨細(xì)胞病毒糖蛋白H基因分型及其與嬰兒HCMV肝炎的關(guān)系研究.pdf

1、人巨細(xì)胞病毒(HCMV)感染在我國(guó)兒童中相當(dāng)普遍，多發(fā)生于嬰兒時(shí)期。肝臟是嬰兒HCMV感染的重要靶器官之一，由HCMV引起的肝臟疾病，是目前我國(guó)嬰兒中最常見(jiàn)的一種肝臟疾病，嚴(yán)重影響了我國(guó)兒童的健康。HCMV大部分基因序列高度保守，但部分基因序列呈現(xiàn)一定的多態(tài)性，如編碼包膜糖蛋白的基因。目前許多研究證實(shí)病毒基因序列多態(tài)性與其不同致病模式相關(guān)聯(lián)。
　　目的：
　　本課題擬通過(guò)研究嬰兒人巨細(xì)胞病毒(HCMV)臨床分離株包膜糖蛋白H

2、(gH)的基因多態(tài)性，分析該基因不同型別與嬰兒HCMV肝炎的關(guān)系，為進(jìn)一步了解HCMV致病機(jī)理及亞單位疫苗研究提供參考。
　　方法:
　　1、收集浙江戶(hù)籍HCMV肝炎患兒的新鮮尿標(biāo)本。所有患兒尿定量HCMV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性，血清HCMV-IgM和抗凝外周血PP65抗原檢測(cè)中一項(xiàng)或兩項(xiàng)陽(yáng)性，均有不同程度的肝功能損害;
　　2、建立Taqman探針熒光定量PCR檢測(cè)gH基因型的方法。在HCMV gH基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，可變

3、區(qū)設(shè)計(jì)分別針對(duì)gH1和gH2型的熒光探針，采用熒光定量PCR技術(shù)建立HCMV gH基因型的檢測(cè)方法;
　　3、用Taqman探針熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HCMV臨床分離株gH基因型，凝膠電泳分析gH基因擴(kuò)增產(chǎn)物片段，DNA測(cè)序分析不同gH基因型的多態(tài)性情況;
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。利用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，對(duì)相關(guān)資料進(jìn)行t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、101例

4、標(biāo)本均被成功分型，其中68例為gH1型HCMV感染，29例為gH2型HCMV感染，4例為兩者同時(shí)感染。101例臨床標(biāo)本以gH1為主，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=67.045，P＜0.01）;
　　2、HCMV gH基因分型在各年齡組中分布無(wú)差異性，均以gH1型為優(yōu)勢(shì)型;
　　3、黃疸肝炎組以3個(gè)月以下患兒為主，非黃疸肝炎組年齡分布無(wú)差異。黃疸型及非黃疸型肝炎組中HCMV gH基因型構(gòu)成無(wú)差異性;
　　4、gH1型HCMV肝

5、炎ALT、AST數(shù)值顯著高于gH2型;而gH2型HCMV肝炎TB、DB數(shù)值顯著高于gH1型HCMV肝炎，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、本研究建立了快速、靈敏、特異地對(duì)HCMV臨床分離株進(jìn)行g(shù)H基因分型的熒光定量PCR技術(shù);
　　2、本研究中浙江地區(qū)嬰兒HCMV肝炎病例HCMV臨床分離株gH基因型別以gH1為主，gH基因序列相對(duì)保守，但仍存在一定的多態(tài)性;
　　3、HCMV gH基因型與嬰兒HCMV肝炎臨