FOXK1協(xié)同Rufy3促進大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移機制研究.pdf

1、目的:
　　Rufy3蛋白參與細胞遷移、肌動蛋白細胞骨架的運動、脂質(zhì)修飾、膜轉(zhuǎn)運和細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種細胞活動過程的調(diào)控。有研究表明，p21活化激酶（PAK1）可以促進Rufy3的表達且協(xié)同Rufy3促進胃癌細胞的侵襲和遷移。另外，轉(zhuǎn)錄因子FOXK1參與胚胎發(fā)育、細胞代謝和分化、組織修復(fù)等活動的調(diào)節(jié)，且在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演癌基因的角色。本課題旨在明確FOXK1和Rufy3在大腸癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮的作用及可能的作用機制。<

2、br>　　方法:
　　1.免疫組織化學(xué)法檢測Rufy3和FOXK1在大腸癌組織和正常大腸黏膜組織中的表達，分析Rufy3和FOXK1的表達量之間的關(guān)系、與大腸癌病人的病例特征、預(yù)后的關(guān)系;
　　2.流式細胞周期技術(shù)、Western blot技術(shù)檢測Rufy3對大腸癌細胞周期的影響;
　　3.構(gòu)建Rufy3穩(wěn)定表達株、EdU染色、裸鼠皮下移植瘤模型檢測Rufy3對大腸癌增殖的影響;
　　4.Transwell侵襲實

3、驗、細胞劃痕、免疫熒光、羅丹明鬼筆環(huán)肽染色等實驗檢測FOXK1和Rufy3對于大腸癌細胞上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化作用(EMT)、侵襲轉(zhuǎn)移功能的影響;5.運用Smad2/3siRNA和Smad4siRNA、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)相關(guān)實驗研究Rufy3作用于大腸癌細胞可能的TGF-β/Smad通路機制;6.構(gòu)建裸鼠原位肝轉(zhuǎn)移模型，免疫組化、qRT-PCR方法檢測E-cadherin、Vimentin的表達情況，研究在體內(nèi)，F(xiàn)OXK1和

4、Rufy3對大腸癌的作用。
　　結(jié)果:
　　1.Rufy3在大腸癌組織中的表達高于正常大腸粘膜組織，Rufy3高表達的大腸癌手術(shù)病人預(yù)后較低表達者差，Rufy3的表達與大腸癌的TNM分期、分化程度、AJCC分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性;
　　2.敲低Rufy3，處于G0/G1期的大腸癌細胞增多，G2/M細胞減少，相關(guān)周期蛋白表達發(fā)生改變;
　　3.過表達Rufy3組的裸鼠皮下瘤較對照組生長快，Ki67

5、表達量高;
　　4.過表達Rufy3促進Vimentin的表達，抑制E-cadherin的表達，加快劃痕愈合速度，增強大腸癌細胞穿透Transwell膜的能力，敲低Rufy3減弱TGF-β1對于大腸癌細胞的EMT作用;
　　5.過表達Rufy3組的裸鼠較Vector組更多發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，且E-cadherin表達降低;
　　6.Rufy3和FOXK1在大腸癌細胞中存在相互作用，并在大腸癌組織中高表達，表達量高者較低者平均生

6、存時間短;
　　7.Rufy3穩(wěn)定表達株，敲低FOXK1后，Vimentin表達下降，E-cadherin表達上升，劃痕愈合速度減慢，穿透Transwell膜的能力減弱;
　　8.Rufy3組較Vector組、Rufy3-FOXK1-siRNA組裸鼠形成的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)多而大，Vimentin的表達量最高。
　　結(jié)論:
　　1.Rufy3在大腸癌組織中的表達高于正常大腸粘膜組織，Rufy3高表達負性影響大腸癌手術(shù)病人的