錳對(duì)人群和SH-SY5Y細(xì)胞中PARK2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究錳對(duì)人群和SH-SY5Y細(xì)胞中PARK2表達(dá)的影響。
　　方法：⑴選取鐵冶煉廠的20名工人為對(duì)照組，錳鐵合金冶煉廠的26名工人為錳暴露組。收集工人的血液和唾液，采用原子吸收分光光度法(atomic absorption spectrometry, AAS)測(cè)定錳和鐵（iron, Fe)的濃度；實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)PARK2 mRNA表達(dá)水平。⑵SH-SY5Y細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：0、100、300、500μ

2、M濃度的MnCl2染毒SH-SY5Y細(xì)胞24小時(shí)后，用MTT法測(cè)細(xì)胞存活率（線粒體損傷），AAS測(cè)定細(xì)胞內(nèi)錳濃度，高度水溶性四唑鹽（WST-1）法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力，硫代巴比妥酸法(thibabituric acid, TBA)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量，反相高效液相(reverse phase high performance liq

3、uid chromatography, RP-HPLC)-熒光法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)多巴胺(dopamine, DA)含量, RT-PCR檢測(cè)PARK2 mRNA表達(dá)水平，蛋白免疫印跡法(western blot, WB)檢測(cè)Parkin蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①與對(duì)照組比較，錳暴露組血漿、紅細(xì)胞（red blood cell, RBC）、唾液和累積錳暴露的錳濃度分別高出2.2,2.0,1.7和3.0倍（P<0.05），錳暴露組血液中PA

4、RK2 mRNA的表達(dá)降低42％（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，PARK2 mRNA的表達(dá)與血漿、RBC、唾液以及累積錳暴露的錳濃度呈負(fù)相關(guān)，r值分別為-0.526(P<0.05)、-0.317(P<0.05)、-0.652(P<0.05)、-0.737(P<0.05)。②SH-SY5Y細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：與對(duì)照組比較，MnCl2濃度為300、500μM時(shí)，細(xì)胞存活率降低（P<0.05）。與對(duì)照組比較，染錳組細(xì)胞內(nèi)錳濃度增高（P<0.05）。與

5、對(duì)照組比較，MnCl2濃度為300、500μM時(shí)，SOD活力和DA含量降低（P<0.05），MDA含量升高（P<0.05）；細(xì)胞PARK2 mRNA表達(dá)和Parkin蛋白表達(dá)降低（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，PARK2 mRNA表達(dá)與線粒體損傷、細(xì)胞內(nèi)錳含量、MDA含量呈負(fù)相關(guān)，r值分別為-0.902,(P<0.05)、-0.880(P<0.05)、-0.862(P<0.05)；PARK2 mRNA表達(dá)與SOD活力、DA含量、Par