FBXW7在腎癌細胞凋亡機制中的初步研究.pdf

1、研究目的:（1）探究腎癌組織和癌旁組織中 FBXW7表達情況。探討FBXW7在腎癌組織和癌旁組織中有無差異，以及對病人預后的影響。
　?。?）通過 CCK8、平板克隆實驗，流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡，檢測過表達FBXW7的腎癌細胞系的細胞活力和增殖能力。
　?。?）通過qPCR、Western blot來探究FBXW7和c-myc，c-Jun之間的關(guān)系。
　　方法：收集105例來自于中山大學腫瘤醫(yī)院和暨南大學華僑醫(yī)院

2、2008年到2012年腎癌和對應(yīng)的癌旁組織的病理樣本，應(yīng)用免疫組化技術(shù)，對樣本進行染色，通過樣本染色的深淺來判斷 FBXW7表達量的多少。通過 qPCR來檢測腎癌細胞系 ACHN，A704對照組和實驗組FBXW7的mRNA表達量。用Western blot來檢測腎癌細胞系A(chǔ)CHN， A704對照組和實驗組 FBXW7的蛋白表達的量，以及 c-myc，c-Jun的蛋白表達的量。通過平板克隆、CCK8等功能實驗比較對照組和實驗組的細胞克隆數(shù)

3、，以及OD值，還有細胞的凋亡和細胞周期的變化來判斷高表達FBXW7對腎癌細胞的增殖能力的影響。
　　結(jié)果：病理樣本免疫組化檢測蛋白表達發(fā)現(xiàn)，癌組織多呈淡染，癌旁組織多呈深染，通過免疫組化積分比較（P<0.0001）這表明癌組織中FBXW7表達遠遠低于癌旁正常組織。腎透明細胞癌FBXW7低表達組（n=22）和高表達組(n=59)的術(shù)后的生存。高表FBXW7組的生存率要明顯好于低表達組（log-rank test,P<0.001）。通

4、過western和Real-Time qPCR在細胞系中的檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染FBXW7質(zhì)粒的ACNH， A704細胞FBXW7 mRNA和蛋白比對照組明顯增多，而c-myc，c-Jun蛋白比對照組明顯減少。轉(zhuǎn)染入FBXW7質(zhì)粒的細胞450nm波長的吸光度值明顯要低于轉(zhuǎn)染入空質(zhì)粒的對照組，細胞增殖活力明顯變?nèi)?Vector vs Plasmid A704：1.327±0.036vs1.035±0.042 P<0.05；ACHN：1.403±0

5、.024vs1.166±0.029 P<0.05)。實驗組細胞克隆數(shù)超過50個的數(shù)量明顯少于對照組，轉(zhuǎn)入FBXW7質(zhì)粒的細胞的增殖能力受到了明顯的抑制。（Vector vs Plasmid ACHN：567±19 vs412±21 P<0.05；A704：279±13 vs144±7 P<0.05）。流式細胞儀用PI法檢測細胞周期，高表達FBXW7的ACHN,A704 G0/G1期所占的比例要高于對照組（Vector vs Plasmi

6、d ACHN51.93％ vs63.25% P<0.05；A70460.31%vs68.32% P<0.05）。高表達FBXW7的ACHN,A704細胞早期和晚期凋亡比對照組多（Vector vs Plasmid ACHN5.1%vs8.5% P<0.05；A70414.1%vs20.4% P<0.05）
　　結(jié)論：（1） FBXW7在癌組織中表達水平低于癌旁組織，高表達FBXW7的腎癌細胞系的活力和增殖能力明顯低于對照組。腎透明