鋅指蛋白ZNF382在乳腺癌中的功能研究.pdf

1、目的：本研究檢測了鋅指蛋白ZNF382（Zinc-finger protein382）在乳腺癌細胞中，乳腺癌配對組織（癌和癌旁）及正常乳腺癌上皮組織中的的表達情況。ZNF382位于19q13.12，并已有文獻報道在結腸癌，鼻咽癌中它可作為抑癌基因誘導細胞凋亡、抑制細胞增殖作用。ZNF382通過下調(diào)AP-1,NF-κ1信號通路發(fā)揮抑癌基因作用，它還可以通過與HP1蛋白相互作用導致基因由常染色質(zhì)向易染色質(zhì)轉化，導致靶基因沉默。文獻顯示乳腺癌

2、組織及多株乳腺癌細胞株中均存在ZNF382表達下調(diào)。故我們提出假設：ZNF382是否作為一個關鍵性抑癌基因參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，找出乳腺癌早期篩查的生物學靶點。
　　方法：
　　1. RT-PCR檢測 ZNF382基因在人乳腺癌細胞株（BT549，MDA-MB-231，MCF-7，T47D，MDA-MB468，T47D，SK-BR-3，BT549，HBL100）中的表達情況。RT-PCR檢測人乳腺正常組織中ZNF382 mR

3、NA表達水平，通過qRT-PCR檢測乳腺癌和癌旁組織中ZNF382的表達量。
　　2.質(zhì)粒轉染ZNF382表達下調(diào)或缺失的乳腺癌細胞株(MB231，MCF7)，篩選并鑒定穩(wěn)定表達ZNF382的細胞株。
　　3.體外及體內(nèi)細胞功能實驗：流式儀檢測細胞周期、CCK-8、克隆形成實驗、劃痕實驗、細胞遷移實驗和裸鼠荷瘤實驗，觀察實驗組（過表達基因ZNF382組）與對照組（空質(zhì)粒）對人乳腺癌細胞功能的影響。
　　結果：
　

4、　1.在乳腺正常組織中ZNF382呈現(xiàn)高表達狀態(tài)，在多株乳腺癌細胞中有表達下調(diào)或缺失，且在ER-HER2+及三陰性乳腺癌組織中ZNF382在癌中的表達明顯低于癌旁，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　2.流式細胞儀檢測MB231和MCF7瞬時轉染細胞的周期改變，結果顯示：外源性表達ZNF382能阻滯細胞周期于G0/G1期，其中MB231細胞株中G1期細胞比率由41.09％增加到50.49%，MCF7中G1期細胞比率由54.56%增加到62.

5、7%（p＜0.001）；CCK8實驗提示過表達ZNF382可明顯抑制MCF7細胞的增殖能力；在劃痕及Transwell遷移實驗中,ZNF382能明顯抑制MB231細胞的遷移能力。
　　結論：在乳腺癌中,ZNF382的表達常常低于癌旁組織及正常乳腺組織。在ZNF382表達下調(diào)或缺失的乳腺癌株中恢復ZNF382表達能顯著抑制腫瘤細胞的增殖，阻滯細胞周期于G0/G1期，并能明顯抑制乳腺癌細胞MB231的遷移能力。綜上所述：ZNF382在