ERK5信號(hào)通路及流體剪切力在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過(guò)程中作用的研究.pdf

1、目的：探討流體剪切力對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響及ERK5信號(hào)通路在該過(guò)程中所起的作用。
　　方法：用全骨髓貼壁細(xì)胞培養(yǎng)法提取昆明小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells。BMSCs)，根據(jù)其表面標(biāo)志特點(diǎn)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定。設(shè)計(jì)翹板搖床流體剪切力(fluid shear stress。FSS)加載模型，用ANSYS-CFX軟件計(jì)算FSS的大小。驗(yàn)證ERK5特異性抑制劑XMD

2、8-92對(duì)ERK5磷酸化的抑制作用，并探討最佳FSS加載時(shí)間。按不同干預(yù)措施分為8組：對(duì)照組、XMD8-92組、成骨誘導(dǎo)液組、成骨誘導(dǎo)液+XMD8-92組、FSS組、FSS+XMD8-92組、FSS+成骨誘導(dǎo)液組、FSS+成骨誘導(dǎo)液+XMD8-92組。培養(yǎng)14天后，進(jìn)行堿性磷酸酶(ALP)活性測(cè)定及茜素紅染色，并提取胞內(nèi)蛋白，用蛋白質(zhì)印記法分別檢測(cè)不同分組ERK5、p-ERK5、ERK1/2、p-ERK1/2、Runx-2、Col-1表

3、達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：從骨髓中提取出的細(xì)胞為梭形，形態(tài)均一，生長(zhǎng)迅速，CD29+、CD44+、CD90+、CD34－、CD45－，且能向成骨細(xì)胞分化，是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。在BMSCs中，5μmol/L的XMD8-92作用1小時(shí)能很好地抑制ERK5的磷酸化，12 dyn/cm2的FSS加載1小時(shí)能很好地激活ERK5磷酸化。成骨誘導(dǎo)液和FSS均能激活ERK1/2的磷酸化(P＜0.001)。FSS組的成骨分化指標(biāo)：ALP活性、鈣結(jié)節(jié)含

4、量、Runx-2、Col-1的表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P＜0.01)。成骨誘導(dǎo)液+XMD8-92、FSS+XMD8-92、FSS+成骨誘導(dǎo)液+XMD8-92三組，以上成骨分化指標(biāo)也均比沒(méi)有XMD8-92的單純成骨誘導(dǎo)液、FSS、FSS+成骨誘導(dǎo)液組高(P＜0.05)。FSS+成骨誘導(dǎo)液組的各成骨分化指標(biāo)均比單純成骨誘導(dǎo)液或FSS組高(P＜0.05)。
　　結(jié)論：FSS能夠通過(guò)刺激ERK1/2的磷酸化促進(jìn)BMSCs的成骨分化，且與成骨