基于轉(zhuǎn)運體和膽酸鹽的異煙肼和對乙酰氨基酚肝損傷機制初探.pdf

1、目的：
　　基于肝細胞膜轉(zhuǎn)運體和膽酸鹽（bile acids，BAs）變化分別初步探討異煙肼（isoniazid，INH）及對乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）致大鼠肝臟損傷的機制。
　　方法：
　　1、運用LC-MS/MS建立同時測定大鼠血液、肝臟、膽汁和尿液中15種BAs的方法。
　　2、Wistar雄性大鼠14只隨機分為2組，即INH肝損傷組（INH組）與對照組（Control組），每組7只

2、，Control組：灌胃給予等容量的生理鹽水；INH組：灌胃給予INH100 mg/kg/d。給藥第60天時，將大鼠禁食12 h，稱重，膽管插管接取膽汁10 min，所得膽汁用于15種BAs的分析測定；腹主動脈采血約5 mL，離心，吸取上清，測定血漿中各項生化指標與各種 BAs；將部分肝臟組織浸泡于10％的甲醛中，石蠟包埋后觀察肝臟病理學(xué)變化，部分肝臟組織樣品用于相關(guān)轉(zhuǎn)運體及BAs的測定。
　　3、Wistar雄性大鼠14只，隨機

3、分為2組，即 APAP組與對照組（Control組），每組7只，Control組：灌胃給予等容量的生理鹽水；APAP組：灌胃給予APAP500 mg/kg。單次給藥后大鼠禁食12 h，稱重，接取膽汁，用于15種BAs的分析測定；腹主動脈采血，測定血漿中各項生化指標與各種BAs；將部分肝組織浸泡于10%的甲醛中，石蠟包埋后觀察肝臟病理學(xué)變化，部分肝臟組織樣品用于相關(guān)轉(zhuǎn)運體和代謝酶及BAs的測定。
　　結(jié)果：
　　1、使用Agi

4、lent HC-C18色譜柱，21分鐘完成BAs的測定；檢測范圍為4.30 ng/mL~200μg/mL；BAs在血漿、肝臟組織、膽汁和尿液基質(zhì)中的日內(nèi)/間準確度LQC、MQC和HQC變化范圍均在80%~104%之內(nèi)，精密度RSD值均小于15%；回收率均高于80%；穩(wěn)定性可靠。
　　2、INH組給藥60天與Control組相比，其部分血漿生化指標呈顯著上升的趨勢；大鼠血漿中的鵝脫氧膽酸（CDCA）、牛磺鵝脫氧膽酸（TCDCA）、牛

5、磺熊去氧膽酸（TUDCA）、熊去氧膽酸（UDCA）、牛磺脫氧膽酸（TDCA）、牛黃膽酸（TCA）和石膽酸（LCA）的含量明顯升高（P<0.05）；膽汁中的TUDCA、UDCA，TDCA和脫氧膽酸（DCA）的含量明顯降低（P<0.05）；肝臟組織中的膽酸（CA）、TCDCA、甘氨鵝脫氧膽酸（GCDCA）、甘氨脫氧膽酸（GDCA）和甘氨石膽酸（GLCA）的含量明顯升高（P<0.05）；INH組較Control組多藥耐藥蛋白2（Mrp2）、多

6、藥耐藥相關(guān)蛋白4（Mrp4）和有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽（Oatps）的蛋白表達水平均明顯降低（P<0.05），膽鹽外排泵（Bsep）和Na+-?；撬峁厕D(zhuǎn)運多肽（Ntcp）表達水平均無顯著差異（P>0.05）。
　　3、APAP組給藥24h，與Control組相比，其部分血漿生化指標呈顯著上升的趨勢；血漿中的DCA、LCA、TDCA、GDCA和GLCA的含量明顯升高（P<0.05）；大鼠膽汁中的CDCA、GDCA、DCA和GLCA的含量明

7、顯升高（P<0.05），TUDCA含量明顯降低（P<0.05）；肝組織中DCA、GDCA、LCA和GLCA的含量明顯升高（P<0.05）；肝組織中Mrp4和 Oatp2蛋白表達水平顯著降低（P<0.05）；Mrp2、Bsep和 Ntcp的蛋白表達水平無明顯變化（P>0.05）；Cyp7a1蛋白表達水平明顯升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、所建立的同時測定大鼠血液、肝臟、膽汁和尿液中15種BAs的方法靈敏度和特異性較