黃連生物堿對HepG2細胞和金黃地鼠的協(xié)同降膽固醇活性及機制研究.pdf

1、心血管疾病是世界上的主要致死病因。眾所周知，血脂異常是引發(fā)心血管疾病如冠心病，外周動脈疾病的主要危險因素之一，血脂異常指的是體內血清總膽固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白水平（LDL-c）和高密度脂蛋白（HDL-c）水平的一種或者幾種發(fā)生異常。因此，改善血清脂質水平可以有效的干擾心血管疾病的進程。黃連具有抗菌、抗病毒、抗炎癥、降血糖、降血脂等功效，小檗堿（BBR）、黃連堿（COP）、巴馬?。≒AL）、表小檗堿（EPI）和藥根堿

2、（JAT）是黃連中主要的活性物質，它們具有相似的異喹啉結構，并且安全性相對較高。前期的研究表明這五種生物堿通過不同的分子機制展現(xiàn)出不同的降膽固醇活性?，F(xiàn)在，針對治療高血脂癥的聯(lián)合療法被認為是一種新的治療方案，它具有降脂作用活性高，用量少，副作用低等優(yōu)勢。因此，本實驗研究，探索五種黃連生物堿（BBR，COP，PAL，JAT，EPI）對HepG2細胞和金黃地鼠的協(xié)同降膽固醇活性和機制的研究。
　　本實驗研究的主要內容和結果：
　

3、?。?）在對數(shù)期HepG2細胞生長狀態(tài)良好的情況下，采用MTT實驗檢測不同濃度的黃連生物堿單體和復合物（COM）對細胞成活率的影響。結果表明，當BBR。COP。PAL。JAT。EPI和 COM的濃度小于等于5μg/ml時，藥物對HepG2細胞成活率的影響很小，細胞成活率大于80％，沒有明顯毒性，所以，在當前實驗條件下，BBR。COP。PAL。JAT。EPI和 COM濃度均選擇5μg/ml作為后續(xù)細胞實驗的適宜濃度。
　　（2）采用

4、油紅O染色法和HPLC分析法，探索比較黃連生物堿單體和復合物對高膽固醇誘導的Hep G2細胞的脂質積累和細胞內膽固醇水平的影響，結果表明，與生物堿單體組相比，COM能更有效的降低細胞內脂滴的積累和膽固醇水平。
　?。?）初步探究黃連生物堿單體和復合物對高膽固醇誘導的Hep G2細胞中膽固醇代謝關鍵靶點的影響。利用qRT-PCR，western blot和免疫熒光的方法，檢測HepG2細胞中參與膽固醇代謝的關鍵基因LDL recpt

5、or，HMGCR和CYP7A1的表達。結果表明，與高膽固醇誘導組（HC）相比，五種生物堿單體和 COM組能不同程度的增加 LDL receptor和CYP7A1的表達，以及降低HMGCR的表達，尤其是COM組，與單體生物堿組相比，在調節(jié)膽固醇關鍵基因方面具有更明顯的優(yōu)勢。
　　（4）進一步探究比較黃連生物堿單體和復合物對金黃地鼠脂質水平的影響。檢測金黃地鼠的血清指標（TC，TG。LDL-c，HDL-c）以及糞便中的TC和總膽汁酸（

6、TBA）水平，結果表明，高脂高膽固醇誘導的金黃地鼠（HFHC）血清中 TC，TG和 LDL-c水平增加，HDL-c水平降低。給藥處理后，與HFHC組相比，TC，TG和 LDL-c水平得到顯著的改善，相同劑量下，COM能分別顯著降低 TC28.4%，TG34.7%，LDL-c22.3%，相反，HDL-c水平顯著增加。與單體組相比，COM能更有效的改善血清中的脂質水平。此外，與生物堿單體組相比，COM有效增加糞便中TC和TBA的排出。因此，

7、可以得出，當五種主要生物堿以一定比例復配到一起時，其降膽固醇的活性顯著提升。
　?。?）為了進一步探究五種生物堿降膽固醇的協(xié)同效應，我們比較了BBR。COP。PAL。JAT，EPI和COM對金黃地鼠的血清和糞便中脂質指標的貢獻率（CR）,結果表明，在改善脂質水平方面，黃連生物堿復合物的貢獻率大于生物堿單獨使用的貢獻率總和，說明黃連生物堿五種主要單體聯(lián)合使用具有協(xié)同效應，能增強降膽固醇的活性。
　　總的來說，黃連生物堿復合物在