產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染小鼠致腹瀉LncRNA表達譜的構(gòu)建.pdf

1、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是引發(fā)全球性的幼畜及幼崽水樣性腹瀉的主要病原微生物，畜牧業(yè)及養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展被ETEC嚴重制約。在發(fā)展中國家，人類公共衛(wèi)生安全的問題也由于ETEC而受到嚴重威脅，主要原因是ETEC是引發(fā)旅游者及嬰幼兒腹瀉的主要病原體。近年來，關(guān)于產(chǎn)腸毒索性大腸桿菌的致病機制研究較多，黏附素(Adhesion)和腸毒素(Enterotoxins)[2-4]是ETE

2、C關(guān)鍵的兩種致病因子，但是，對于感染性疾病而言，其發(fā)生與發(fā)展均是病原菌和宿主細胞互相作用的結(jié)果。因此，深入研究病原微生物與宿主細胞的相互作用機制是徹底治療感染性疾病的關(guān)鍵所在。然而，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA(Longnon-coding RNA，LncRNA)在癌癥、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和感染性疾病等眾多疾病致病機制中發(fā)揮著不可小覷的作用[56]。LncRNA是不編碼蛋白質(zhì)，而在多環(huán)節(jié)中調(diào)控基因表達的一類RNA分子的總稱

3、，其轉(zhuǎn)錄本長度超過200核苷酸，主要位于細胞核內(nèi)，可從轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后或表觀遺傳等層面[54]。而目前有關(guān)于LncRNA與ETEC引發(fā)的腸道感染性疾病的研究尚未見報道。
　　目的:建立及評價產(chǎn)腸毒索性大腸桿菌感染小鼠致腹瀉的模型，通過LncPath芯片技術(shù)篩選顯著性差異表達的LncRNA并驗證。
　　方法:將ETEC腹腔注射感染小鼠建立感染性腹瀉的模型，通過形態(tài)學觀察，體重變化，腹瀉率/腹瀉指數(shù)記錄及組織病理學觀察，對小鼠模型進

4、行初步評價。提取小鼠腸組織中的全蛋白，通過標記法蛋白芯片的技術(shù)，檢測感染ETEC后小鼠腸組織中Th1、Th2、Th17細胞因子的變化，進一步評價動物模型。提取小鼠腸組織中的總RNA，通過LncPath芯片技術(shù)，進行生物信息學分析并篩選顯著性差異表達的LncRNA和mRNA，預(yù)測ETEC引發(fā)的感染性疾病的靶基因。
　　結(jié)果:
　　(1)ETEC感染小鼠后，小鼠腹瀉率、腹瀉指數(shù)均顯著升高，體重下降。
　　(2)組織病理學觀

5、察，ETEC感染小鼠后，腸組織結(jié)構(gòu)被破壞，微絨毛脫落，組織嚴重損壞且有炎性細胞浸潤。
　　(3)ETEC感染小鼠后，腸組織中IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-23、GM-CSF均顯著性升高，且Th1、Th2細胞因子的總體水平上高，Th1/Th2的比值降低。
　　(4)ETEC感染小鼠后，腸組織中有9條LncRNA表達差異且有統(tǒng)計學意義，其中表達水平上調(diào)2條，表達水平下調(diào)7條。腸組

6、織中差異表達的mRNA有26條，其中表達水平上調(diào)15條，表達水平下調(diào)11條。
　　結(jié)論:
　　(1)產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染后小鼠發(fā)生腹瀉，體重下降，腸組織被破壞。
　　(2)產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染小鼠后腸組織中Th1/Th2細胞因子的動態(tài)平衡發(fā)生漂移，偏向Th2型細胞因子，導致機體發(fā)生炎癥反應(yīng)。
　　(3)產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染小鼠后腸組織中LncRNA存在差異表達。
　　(4)LncRNA ENSMUST