DICER基因單核苷酸多態(tài)性及其表達(dá)在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究.pdf

1、目的:
　　在我國(guó)，肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是僅次于肺癌的最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性腫瘤，也是腫瘤導(dǎo)致的相關(guān)死亡的主要原因之一。統(tǒng)計(jì)分析顯示，中國(guó)每年新增肝癌病例估計(jì)有340000例，占世界上肝癌病例的55％。此外，盡管治療手段在過(guò)去幾十年中取得了較大改善，如手術(shù)切除、化療、肝移植等聯(lián)合應(yīng)用，但肝細(xì)胞癌患者的預(yù)后仍然很差。肝細(xì)胞癌是一種由多個(gè)基因和多種環(huán)境因素引起的復(fù)雜疾病，病理學(xué)研究已經(jīng)確定了

2、一些引起肝癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素，包括接觸黃曲霉毒素、酒精濫用、減少抗氧化微量營(yíng)養(yǎng)素的攝入、乙型肝炎病毒感染。近些年，很多報(bào)告表明，基因多態(tài)性在肝癌的發(fā)展和預(yù)后中扮演重要角色。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs表達(dá)在各種疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中行使重要功能。而RAN、HIWI和Dicer三個(gè)基因在miRNAs成熟過(guò)程中發(fā)揮決定性的作用。所以本研究擬結(jié)合臨床和基礎(chǔ)研究，探索RAN、HIWI和Dicer三個(gè)基因多態(tài)性與肝癌患者易感性及預(yù)后之間的相關(guān)性。
　

3、　微小RNA(MicroRNAs，miRNAs)具有基因表達(dá)調(diào)控功能，在肝細(xì)胞癌(HCC)的發(fā)病機(jī)制及預(yù)后中扮演著重要的角色。miRNA加工基因的遺傳變異可能影響miRNAs的表達(dá)，導(dǎo)致肝癌的發(fā)生和生存風(fēng)險(xiǎn)的變化。所以我們推測(cè)miRNA加工基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)可能與肝癌易感性和預(yù)后有關(guān)，以及miRNA加工基因Dicer的表達(dá)改變也對(duì)肝癌的發(fā)生發(fā)展有影響。
　　方法:
　　首先，我們采用TaqMan assay的方法

4、對(duì)312名肝癌患者和320名正常對(duì)照的miRNA加工基因的三種SNPs(RAN rs3803012 A＞G，HIWI rs10773771 T＞C，和DICER rs1057035 T＞C)進(jìn)行基因分型，評(píng)估這三種SNPs和肝癌風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系。然后，我們通過(guò)結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床隨訪資料，研究了這三種SNPs對(duì)312名肝癌患者預(yù)后的影響。
　　其次，我們采用western blot方法分別對(duì)11例肝癌組織、11例正常肝臟組織、2種肝臟細(xì)胞(

5、HL7702和L-02)、4種肝癌細(xì)胞(LM3、HepG2、Hep3B和MHCC97H)內(nèi)Dicer蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。另外，我們使用過(guò)表達(dá)載體pcDNA3.1-DICER轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系MHCC97H后，分別使用western blot，MTT，流式細(xì)胞術(shù)及transwell方法對(duì)MHCC97H細(xì)胞內(nèi)Dicer表達(dá)情況以及MHCC97H細(xì)胞的增殖能力、凋亡情況、侵襲能力進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果:
　　三種SNPs(RAN r

6、s3803012 A＞G，HIWI rs10773771 T＞C，和DICERrs1057035 T＞C)和肝癌風(fēng)險(xiǎn)間沒(méi)有明顯相關(guān)性(p＜0.01)。但是，攜帶DICERrs1057035 CT+CC基因型的肝癌患者與rs1057035 TT基因型的肝癌患者相比，有明顯較長(zhǎng)的中位生存時(shí)間（秩和檢驗(yàn)P=0.018）和明顯減少的死亡率(校正HR=0.68，95％CI:0.49-0.95，P=0.022)。這些效果在年齡小于60歲，吸煙，B階

7、段，女性，經(jīng)過(guò)化學(xué)或干預(yù)療法的患者中更明顯(HR=0.48，0.60，0.69，0.46，0.67，所有p＜0.05)。
　　Dicer蛋白在肝癌組織及肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)均低于正常肝臟組織和肝臟細(xì)胞。且轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pcDNA3.1-DICER使肝癌細(xì)胞MHCC97H中Dicer水平明顯提高，同時(shí)降低了MHCC97H細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力，促進(jìn)了MHCC97H細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　本研究表明DICER rs105