肝細胞生長因子受體與食管鱗癌放射敏感性的相關性研究.pdf

1、目的：食管癌是我國高發(fā)和導致癌性死亡的常見惡性腫瘤之一，病理類型以食管鱗狀細胞癌多見。放射治療，是食管癌治療的基本方法之一。但是由于周圍正常組織耐受劑量的限制，腫瘤組織的劑量往往達不到最佳照射劑量。探索新的放射治療增敏方法是目前食管癌治療的一大熱點。
　　目前肝細胞生長因子受體(Met)信號通路與腫瘤的放射的敏感性相關而得到關注。Met信號通路具有多種生物活性，如細胞增殖、生存、胚胎形成、血管再生、組織損傷修復。Met信號通路的激

2、活不僅與多種腫瘤的發(fā)展、轉移密切相關，還參與DNA修復機制，進而參與放療抵抗的機制。
　　因此，本研究通過免疫組化檢測Met在食管鱗狀細胞癌組織中的表達，探討Met蛋白表達與食管鱗狀細胞癌患者預后的關系，以及放射治療療效的影響。并在體外研究Met抑制劑抑制Met后食管癌細胞株的生物學性狀改變，以及聯(lián)合放射線來明確Met抑制劑能否增加放療敏感性，為食管鱗狀細胞癌的放射增敏提供新的思路。
　　方法：選取180例ⅡB-ⅢC期食管鱗

3、狀細胞癌患者石蠟包埋蠟塊進行免疫組化檢測。不同濃度BPI-9016M處理后的Eca109食管癌細胞株為實驗組，無藥物處理的Eca109食管癌細胞株為對照組。作用48小時后，用CCK-8比色法檢測細胞體外增殖變化;不同濃度BPI-9016M對Eca109食管癌細胞株作用48小時后，流式細胞技術檢測細胞周期改變，AnnexinⅤ/PI雙染法檢測觀察細胞凋亡變化;BPI-9016M聯(lián)合放射線照射Eca109食管癌細胞株后，集落形成分析檢測細胞

4、體外增殖和生長變化以及Met抑制劑對細胞放射敏感性的影響;定量RT-PCR檢測不同處理組細胞中Met基因表達情況，以及Western Blot分析檢測Met，P53，Bax，BCl-2，Caspase3，Caspase9，Ercc-1蛋白的表達差異。應用生存曲線計算總體生存，log-rank檢驗檢查生存曲線的差別;Cox比例風險回歸模型用于單因素和多因素的分析。計量資料應用t檢驗進行統(tǒng)計學差異檢驗。統(tǒng)計分析采用SPSS21.0軟件。

5、r>　　結果：1.通過免疫組化的方法，發(fā)現(xiàn)Met蛋白在食管鱗狀細胞癌中存在表達差異。Met高表達和低表達與患者的預后顯著相關（中位生存分別為41.9個月和56.7個月，P=0.001）。在行放療的患者中，Met蛋白高表達與患者的預后差顯著相關(P=0.002)。
　　2.CCK-8比色法實驗結果顯示，BPI-9016M明顯抑制Eca109食管癌細胞體外增殖生長，存在量-效關系，與對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);流式

6、細胞術分析結果顯示，通過BPI-9016M抑制Met對Eca109食管癌細胞各周期細胞比例影響不大;應用AnnexinⅤ/PI雙染法檢測到Met靶向藥BPI-9016M作用于Eca109食管癌細胞48h后有不同程度的凋亡發(fā)生，存在量-效關系，與對照組相比較具有有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);Eca109食管癌細胞的生長受放射線的影響，放射劑量越大，Eca109細胞生長越受限制，并且Met抑制劑對Eca109細胞有放療增敏作用。定量RT-P

7、CR結果顯示，Eca109食管癌細胞經(jīng)BPI-9016M處理，聯(lián)合或不聯(lián)合放射線照射，都會是Met基因表達下降;Western Blot結果顯示，Eca109食管癌細胞經(jīng)BPI-9016M聯(lián)合放射線照射后，會使激活態(tài)p-Caspase9、激活態(tài)p-Caspase3蛋白上調(diào)，并使Met，Bcl-2，P53，Ercc-1蛋白下調(diào)。
　　結論：在食管鱗狀細胞癌組織中，Met的表達存在差異性，且與患者的生存及放療敏感性有關。體外實驗也顯示