合并梗阻性黃疸的膽管癌膽汁蛋白組學研究.pdf

1、目的:膽管癌(Cholangiocarcinoma，CC)是起源于膽管上皮細胞的惡性腫瘤，惡性程度高，對放化療不敏感，預后極差，五年生存率接近于零。近些年其發(fā)病率呈顯著的上升趨勢。手術根治性切除是目前臨床治療膽管癌唯一有效的治療手段，但是由于膽管癌起病隱匿，目前影像等檢測手段的限制，大部分患者發(fā)現(xiàn)時已無法進行手術根治性切除，因此早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對改善膽管癌的預后極其重要。本研究的目的是通過蛋白質組學等手段篩選出人膽汁中的潛在的膽管癌生

2、物分子標志物，并驗證其相應在膽管癌中的診斷效力。
　　方法:本研究收集臨床上合并梗阻性黃疸的膽管癌及膽石癥患者膽汁，采用高效反向液相色譜(RPLC)以及液質離子阱質譜儀(LC-MS/MS)技術相結合構建完成了人的膽汁的差異蛋白質表達譜。進一步采用STRING數據庫對這些差異蛋白進行生物信息學分析并結合目前的研究進展，挑選出LCN1和PTTG1IP作為潛在的分子標志物，通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測LCN1和PTTG1IP在C

3、C、膽石癥患者膽汁中的表達水平，評估其作為新標志物的診斷價值，并從細胞水平采用免疫印跡法(Western blotting)對這兩個差異蛋白的表達情況進行了驗證和分析。
　　結果:通過RPLC-MS/MS檢測出了1985種蛋白質，共發(fā)現(xiàn)了285個差異蛋白質，其中198個是在CC患者的膽汁中明顯高表達，87個蛋白質在CC患者膽汁中低表達。緊接著我們結合目前的差異蛋白質的研究方面查詢相關信息后，我們通過數據庫結合目前的研究進展從中挑選

4、了LCN1和PTTG1IP兩個蛋白質，并且我們利用ELISA對LCN1和PTTG1IP在CC、膽石癥膽汁中的表達水平進行了定量分析，結果提示LCN1和PTTG1IP能很好的將膽管癌和膽石癥病人區(qū)分開，其敏感度和特異度分別為80％，92％和60％，92％。同時，利用膽管癌細胞及其正常膽管上皮細胞樣本進行的免疫印跡的結果也顯示這兩個蛋白在腫瘤細胞中的表達要顯著高于正常細胞。LCN1和PTTG1IP這兩個標志物在膽管癌的診斷中明顯優(yōu)于CA19