長鏈非編碼RNA TUG1在血管內皮細胞中的功能及機制研究.pdf

1、目的:
　　冠心?。╟oronary artery disease，CAD）嚴重危害人類健康，是全球范圍內致死和致殘的主要原因之一。冠心病是動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）所導致器官病變的常見類型，由于動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展是多因素介導的慢性炎癥反應的過程，其分子機制尚未完全闡明。近幾年的研究表明長鏈非編碼RNAs(longnoncoding RNAs，lncRNAs)廣泛參與生理病理機制，在轉錄水平、轉錄后

2、水平等多層面調控基因的表達，因此可能成為具有疾病診斷和治療價值的新分子。既往研究發(fā)現(xiàn)lncRNA TUG1(taurine up-regulated1)在腫瘤等疾病中具有重要的調節(jié)功能，且TUG1在血管內皮細胞中的表達豐度較高。但目前TUG1與心血管疾病的關系尚無研究報道。本研究擬通過病例對照分析和功能機制等方面的研究，探索TUG1與內皮細胞功能紊亂及動脈粥樣硬化的關系，為冠心病的預防和治療提供新的思路和方向。
　　方法:

3、　　1.采用病例對照研究方法，納入54例冠心病患者和75例健康對照，分離外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)提取總RNA，應用real-time PCR方法檢測病例組和對照組PBMCs中TUG1表達水平的差異。
　　2.采用敲低策略研究TUG1在人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)中的功能及分子機

4、制。在HUVECs中采用RNAimax轉染siRNA敲低TUG1的表達，檢測TUG1對內皮細胞凋亡、增殖的影響，以及與細胞間粘附分子（ICAM-1）、血管細胞粘附分子（VCAM-1）表達和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信號通路的關系。采用AnnexinⅤ-FITC細胞凋亡檢測試劑盒和MTT比色法分別檢測內皮細胞凋亡和增殖活性。利用HERAcell150i低氧細胞培養(yǎng)箱建立內皮細胞缺氧損傷模型，利用腫瘤壞死因子TNF-α建立

5、炎癥損傷模型。應用real-time PCR和Western blot方法，分別檢測相關基因的mRNA和蛋白水平。
　　結果:
　　1.Real-time PCR結果顯示，與對照組相比，TUG1表達水平在病例組中顯著升高，在冠心病病例組中的表達水平是對照組的1.4倍，結果存在統(tǒng)計學差異(P＜0.001)。
　　2.在HUVECs中，TUG1的表達豐度相對較高。采用siRNA敲低TUG1表達抑制內皮細胞凋亡，促進細胞增殖

6、(P＜0.05)。同時，在低氧及炎癥因子TNF-α刺激的細胞損傷模型中，敲低TUG1表達同樣抑制低氧和TNF-α損傷引起的內皮細胞的凋亡(P＜0.05)。
　　3.在HUVECs中敲低TUG1表達后，抑制細胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1在mRNA和蛋白水平的表達(P＜0.05);敲低TUG1后抑制TNF-α誘導的ICAM-1和VCAM-1表達水平(P＜0.05)。
　　4.在正常生理培養(yǎng)下或TNF-α刺激的條件下，敲低

7、TUG1表達后，p38 MAPK通路p38蛋白的磷酸化水平均顯著降低(P＜0.05)。
　　結論:
　　本研究通過冠心病病例對照研究和體外細胞實驗初步探索了lncRNA TUG1在冠心病及內皮細胞中的功能。TUG1在冠心病病例組的PBMCs樣本中表達水平顯著高于對照組，提示該lncRNA可能參與冠心病的發(fā)生過程。在血管內皮細胞中敲低TUG1能抑制內皮細胞凋亡，減少低氧及TNF-α刺激下內皮細胞的損傷，降低細胞粘附因子ICAM