CD24分子在刀豆蛋白A誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的作用及機制研究.pdf

1、目的:急性肝損傷(Acute liver injury)是臨床較為常見、嚴重影響人類健康的全球危害性疾病。外界有毒物質(zhì)、病原微生物以及藥物等均可能造成急性肝損傷，該疾病表現(xiàn)為:短時間內(nèi)肝細胞出現(xiàn)壞死、出血，血清谷丙/草轉(zhuǎn)氨酶及細胞因子急劇升高，累積多臟器功能障礙，嚴重至肝功能衰竭。目前對于急性肝損傷的機制仍然不明確。越來越多的證據(jù)表明肝臟由于其雙重血供，該器官其實也是一個特殊的免疫耐受微環(huán)境。研究表明導(dǎo)致肝損傷的原因并非是外界物質(zhì)的直接

2、作用，而是表達在受感染的肝臟細胞表面針對抗原所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答導(dǎo)致嚴重的免疫失衡，繼而產(chǎn)生大量的炎癥因子致使肝損傷發(fā)生直至嚴重的多器官功能障礙。CD24是一種人和鼠中多種細胞表面表達的、具有多種不同生物學(xué)功能的低分子量的細胞表面膜蛋白。CD24分子被證實調(diào)控了自身反應(yīng)性T細胞和抑制抗原遞呈及T細胞活化作用。刀豆蛋白A誘導(dǎo)的肝損傷模型較為真實的模擬急性免疫性肝損傷的體內(nèi)過程。然而CD24分子在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用尚未報道。

3、r>　　本論文的主要研究內(nèi)容概括如下:一、CD24缺陷小鼠與同窩野生型小鼠在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝損傷模型中肝損傷程度（包括肝臟病理、血清ALT水平和細胞因子表達水平）的差別。二、研究造成差別的免疫機制（包括肝臟細胞亞群和相關(guān)細胞信號通路）。
　　方法:通過尾靜脈注射刀豆蛋白A建立小鼠急性肝損傷模型，比較CD24缺陷小鼠及同窩野生型小鼠在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝損傷程度（包括肝臟病理、血清ALT水平和細胞因子表達水平）的差異。檢測肝

4、臟及脾臟中CD4+T及CD8+T細胞表面CD24表達的表達水平。檢測CD24缺陷小鼠和對照組小鼠T細胞的成熟情況。確認CD24缺陷小鼠導(dǎo)致急性肝損傷差異的細胞來源(胞內(nèi)染色確定CD4+、CD8+T和NKT細胞釋放IFN-γ)。再通過過繼轉(zhuǎn)輸實驗體內(nèi)確定急性肝損傷差異的免疫細胞來源。通過刀豆蛋白A、抗CD3/CD28抗體及PMA/Ionomycin體外刺激CD24缺陷小鼠及對照小鼠T細胞，確認產(chǎn)生IFN-γ差異的T細胞。通過Western

5、 blot方法分析CD24缺陷小鼠及對照小鼠在刀豆蛋白A作用后，肝臟及脾臟T細胞相關(guān)信號通路的差異，尋找相關(guān)的信號分子。
　　結(jié)果:(1)刀豆蛋白A刺激后使T細胞上CD24分子表達明顯上調(diào);(2)體內(nèi)實驗表明刀豆蛋白A對CD24缺陷小鼠所造成的肝損傷程度明顯低于野生型小鼠;(3)體內(nèi)實驗和體外實驗均證實，在刀豆蛋白A造成肝損傷情況下，CD24缺陷的CD4+T細胞所分泌的IFN-γ較少;(4)在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的肝損傷后，CD24缺陷