DNA甲基化在UVA誘導皮膚胚胎成纖維細胞慢性損傷中的作用.pdf

1、DNA甲基化在UVA誘導皮膚胚胎成纖維細胞慢性損傷中的作用重慶大學碩士學位論文(學術(shù)學位)學生姓名：周斌指導教師：鐘莉教授專業(yè)：生物醫(yī)學工程學科門類：工學重慶大學生物工程學院二O一七年四月重慶大學碩士學位論文中文摘要I摘要背景：背景：皮膚是身體對其環(huán)境如紫外線輻射和外源性化學物質(zhì)等有害因素的屏障。其中長期長波紫外線（UVA）輻射能引起皮膚慢性損傷，造成皮膚光老化，炎癥現(xiàn)象以及皮膚癌變。細胞內(nèi)DNA甲基化在UVA輻射下會發(fā)生改變，其中DN

2、A甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）在UVA輻射下的改變會參與細胞的生長、周期、癌變等調(diào)節(jié)。DNMTs在小鼠胚胎成纖維細胞中受UVA輻射的影響，以及DNMTs的改變與細胞體內(nèi)的CCND表達的變化的關(guān)系是本文的創(chuàng)新點。目的：目的：在不同UVA劑量（25KJm2、50KJm2、100KJm2、150KJm2、200KJm2）對小鼠胚胎成纖維細胞（NIH3T3）重復照射（每一次間隔24h）三次下，從蛋白水平和mRNA水平來檢測DNMTs的表達；檢測不

3、同濃度的5az（0.25M0.5M1.0M）對NIH3T3細胞活力的影響并和與UVA（100KJm2）聯(lián)合作用下對細胞活力的影響以及對細胞的慢性損傷。檢測細胞在5az處理聯(lián)合UVA誘導輻射作用下，DNMTs（DNMT1DNMT3aDNMT3b）表達水平。檢測5az處理聯(lián)合UVA誘導輻射作用下周期相關(guān)基因（CCND1CCND2）的表達變化。研究方法：研究方法：采用MTS法檢測UVA和5az對NIH3T3細胞活力的影響；采用實時定量PCR法

4、(qRTPCR)來檢測DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、CCND1、CCND2、HO1mRNA的表達水平變化。采用Westernblotting檢測DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、CCND1、CCND2、HO1等相關(guān)蛋白的表達變化。結(jié)果：結(jié)果：1.多次有規(guī)律的UVA輻射下，NIH3T3細胞活力降低，且細胞活力降低的程度與UVA的劑量成劑量依賴性：對NIH3T3細胞進行多次UVA輻射（相同劑量重復三次UVA輻射，每次照射間隔

5、24h）后，不同劑量使細胞的活力呈明顯的降低趨勢。在低劑量時候，降低的不明顯。但在高劑量輻射（100KJm2）后與非輻射組相比，，細胞的形態(tài)，以及細胞的活力皆呈明顯的降低趨勢。在大劑量輻射下（與對照組相比），在細胞的形態(tài)上細胞明顯皺縮并存在大量的細胞碎片。2.5az處理與UVA輻射聯(lián)合作用對小鼠胚胎成纖維細胞（mouseembryonicfibroblast）的細胞各項指標的影響:5az降低了細胞因UVA輻射誘導的DNMT1，DNMT3