長鏈非編碼RNA SPRY4-IT1調控乳腺癌細胞的功能研究.pdf

1、乳腺癌是最常見的女性惡性腫瘤，而腫瘤轉移又是乳腺癌致死最重要的原因，對乳腺癌轉移機制的研究是目前乳腺癌研究的重要方向。腫瘤轉移的關鍵第一步是上皮間質轉化（EMT）。長鏈非編碼RNA（LncRNA）是一種長度超過200個核苷酸是非編碼RNA。研究報道，LncRNA可通過多種方式，在轉錄水平或轉錄后水平參與調控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。SPRY4-IT1是 LncRNA中的一種，其在多種腫瘤包括乳腺癌中扮演重要角色，參與調控腫瘤的侵襲、增殖、轉移。最

2、早的文獻報道，過表達 SPRY4-IT1在黑色素瘤中具有促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。在乳腺癌中，有文獻報道，SPRY4-IT1與乳腺癌細胞的增殖相關，過表達SPRY4-IT1能夠通過調控鋅指蛋白703從而促進乳腺癌細胞的增殖。但是，在乳腺癌中SPRY4-IT1與EMT兩者之間是否存在調控關系，對EMT的具體影響如何，尚未有文獻報道。
　　本研究通過實時定量PCR的方法分析乳腺癌Luminnal型細胞株MCF7，T47D，Her2型細胞

3、株SKBR3和三陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-231、BT549、BT474中SPRY4-IT1的表達，發(fā)現(xiàn)在mRNA水平，ERα陽性Luminnal型細胞株MCF7，T47D中SPRY4-IT1表達水平較低，而ER陰性的乳腺癌細胞系SKBR3、BT549、MDA-MB-231、BT474中SPRY4-IT1表達水平相應較高。通過在內源性表達比較低的MCF7細胞中過表達SPRY4-IT1，通過劃痕、浸潤、遷移實驗，結果顯示外源性過表達

4、SPRY4-IT1能夠促進細胞遷移、浸潤、轉移潛能。并且，我們通過平板克隆實驗和CCK8細胞實驗證明，外源性過表達SPRY4-IT1也能夠促進乳腺癌細胞克隆形成能力和增殖能力。與此同時，我們通過在內源性表達比較高的細胞MDA-MB-231中敲減SPRY4-IT1，下調SPRY4-IT1的表達，然后通過劃痕、浸潤、遷移實驗，結果顯示下調SPRY4-IT1的表達能夠抑制細胞遷移、浸潤、轉移潛能。并且，我們通過平板克隆實驗和CCK8細胞增殖實

5、驗證明證明，敲減SPRY4-IT1能夠抑制乳腺癌細胞克隆形成能力和增殖能力。實驗發(fā)現(xiàn)并且證明SPRY4-IT1與乳腺癌的遷移、浸潤、轉移潛能相關。而EMT的過程在腫瘤遷移、浸潤、轉移中發(fā)揮重要作用，因此我們分析SPRY4-IT1是否介導調控乳腺癌EMT過程。我們在內源性表達比較低的MCF7細胞中過表達SPRY4-IT1，通過免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)，SPRY4-IT1的上調能夠使腔上皮細胞標志E-cadherin表達降低。同樣的，我們通過在內源