長鏈非編碼RNA SPRY4-IT1在膀胱癌的表達及功能研究.pdf

1、背景：在泌尿系統(tǒng)中，膀胱惡性腫瘤是最常見的腫瘤，威脅人類健康。盡管目前膀胱癌的診斷治療取得了巨大的進步，但仍有許多問題未能解決，其發(fā)病率較高并且逐年增高，同樣復發(fā)率、轉移率以及死亡率居高不下，造成社會沉重的治療負擔，膀胱癌是難以徹底治愈的癌癥疾病之一。手術治療適于早中期膀胱癌患者，但容易復發(fā)；膀胱癌晚期多出現(xiàn)盆腔淋巴結等轉移，已不適宜手術，多采用放化療、生物治療等姑息治療措施，患者的死亡率高。進一步研究膀胱癌發(fā)病機制、探究新的診療方案具

2、有重要臨床應用意義，尤其對易復發(fā)的膀胱癌患者以及放化療不敏感的晚期姑息治療的患者有重要臨床意義。長鏈非編碼RNA轉錄本長度大于200 bp，LncRNA雖不翻譯、不編碼蛋白，與腫瘤生長和患者預后等相關，科研工作者們研究發(fā)現(xiàn)大量LncRNA在人類腫瘤等疾病的發(fā)生進展中l(wèi)ncRNA起著重要的調控作用，重新審視lncRNA在腫瘤等疾病中的作用，徹底摒棄過去視lncRNA為轉錄噪音的錯誤認識;且編碼RNA分子數(shù)量遠少于功能廣泛的非編碼的lncR

3、NA，因此lncRNA的表達與人類疾病特別是腫瘤疾病的內在聯(lián)系越來越引起人們的重視。SPRY4內含子轉錄本1( SPRY4-IT1)（基因 ID：100642175）是目前眾多l(xiāng)ncRNA中研究較成熟的一種，在各腫瘤疾病中功能機制研究較為深入，在之前的文獻中報道其異常表達與乳腺癌、胃癌、肺癌、腎癌和腦腫瘤等多種人類腫瘤疾病密切相關，表明可能是與人類癌癥疾病相關聯(lián)的一類必要的疾病發(fā)生因子，或可作為檢測腫瘤疾病的新的生物學指標，仍需要在臨床

4、實踐中進一步的驗證。
　　目的：研究SPRY4-IT1在膀胱癌的表達及其意義，并探索SPRY4-IT1在膀胱癌細胞及膀胱正常上皮細胞功能。
　　方法：收集膀胱癌組織標本及其配對的癌旁正常組織標本，使用實時qRT-PCR法檢測SPRY4-IT1在膀胱組織標本和細胞相對表達水平并分析其臨床病理特征之間關聯(lián)；使用特異性的小干擾RNA( si-SPRY4-IT1)轉染兩種膀胱癌細胞，以及過表達質粒pcDNA3.1-SPRY4-IT1

5、轉染正常膀胱上皮細胞,使用實時qRT-PCR法檢測si-SPRY4-IT1和pcDNA3.1-SPRY4-IT1效果，再分別以CCK-8實驗、MTT實驗、劃痕實驗、ELISA實驗和流式實驗檢測si-SPRY4-IT1對膀胱癌細胞以及pcDNA3.1-SPRY4-IT1對正常膀胱上皮細胞在增殖、遷移和凋亡等方面的影響。
　　結果：相對于膀胱癌旁組織標本，SPRY4-IT1在膀胱癌組織標本中高表達
　?。?8.33％，P=0.0

6、263），SPRY4-IT1表達水平與病理分級(P<0.05)和TMN分期(P<0.001)有關，與年齡性別等無關，同時相對于正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1， SPRY4-IT1也在5637（P=0.00229）和T24（P=0.00012）兩種膀胱細胞中明顯高表達。特異的小干擾RNA si-SPRY4-IT1可顯著降低SPRY4-IT1表達(P<0.001)，特異的小干擾RNA si-SPRY4-IT1可顯著抑制兩種膀胱細胞的增殖(

7、P<0.001)、遷移(P<0.01)和增加凋亡(P<0.01)。PcDNA3.1-SPRY4-IT1可顯著上調SPRY4-IT1表達(P<0.001)，可促進膀胱上皮細胞的增殖(P<0.05)、遷移(P<0.001)和抑制凋亡(P<0.01)。
　　結論：SPRY4-IT1在膀胱癌標本組織和細胞水平相對高表達，與膀胱的癌的組織病理學分級、臨床TNM分期相關，具有促進膀胱癌細胞生長的作用，參與到膀胱癌細胞的生長過程調控等，在膀胱癌