支原體巨噬細胞活化脂肽-2經(jīng)MAPKs途徑誘導THP-1細胞表達MMP-9.pdf

1、支原體感染機體后主要通過單核、巨噬細胞清除病原體。其中單核細胞以阿米巴樣運動穿過血管內(nèi)皮細胞，隨后突破血管基底層和結締組織到達感染部位是發(fā)揮免疫應答的重要步驟。在此過程中，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）能通過降解細胞外基質(zhì)，從而參與炎癥反應以及血管生成等多種生物學效應，因而發(fā)揮著關鍵作用。臨床研究和動物實驗表明，支原體感染后，患者血清或大鼠羊水中MMP-9含量顯著增高，這表明MMP-9也參與了支原體感染后的炎癥反應。
　　為了進一步了

2、解支原體感染對MMP-9分泌的影響，本研究從以下幾方面進行體外研究：
　?。?）培養(yǎng)人單核細胞系THP-1細胞，分別用0.1、1.0和5.0κg/mL的支原體巨噬細胞活化脂肽-2（MALP-2）刺激不同時間，用ELISA和Western blot分別檢測細胞培養(yǎng)上清中MMP-9的含量以及金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）的表達；實時定量PCR觀察MMP-9以及TIMP-1 mRNA的表達水平；比色法分析MMP-9活性的變化

3、。
　?。?）THP-1細胞預先與絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制劑孵育30min，隨后用5κg/mL MALP-2刺激18h， ELISA觀察其對MMP-9分泌的影響。結果顯示：THP-1細胞基礎狀態(tài)下MMP-9和TIMP-1表達水平較低。當分別給予0.1、1.0和5.0κg/mL MALP-2作用18h后，可誘導THP-1細胞分泌MMP-9和表達TIMP-1，且隨著MALP-2濃度的增加，MMP-9的產(chǎn)生以及TIMP-1表達

4、水平相應增加，但TIMP-1的增幅低于MMP-9；實時定量PCR的結果表明：不同濃度的MALP-2處理THP-1細胞16h后，也可上調(diào)細胞內(nèi)MMP-9和TIMP-1 mRNA的表達水平，但MMP-9 mRNA增高更顯著。同時MALP-2處理也可增加細胞培養(yǎng)上清中MMP-9的酶活性。此外， MALP-2作用THP-1細胞6h后即可上調(diào)MMP-9 mRNA表達，隨著時間的延長，mRNA表達水平逐漸增高，16h后達到峰值，并持續(xù)高表達至36h