骨髓瘤細(xì)胞株H929的SOX2蛋白及趨化相關(guān)基因CCR1、CCR2、MCP-1等轉(zhuǎn)錄受白介素-1β預(yù)處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞影響.pdf

1、目的：觀察白介素（interleukin，IL）-1β單次或多次預(yù)處理人BMMSCs后，對(duì)BMMSCs的BMP-2表達(dá)的影響；以及不同方案預(yù)處理的BMMSCs與MM細(xì)胞株共培養(yǎng)后，觀察其對(duì)骨髓瘤細(xì)胞的干細(xì)胞相關(guān)蛋白、趨化細(xì)胞因子及其相關(guān)受體等表達(dá)的影響。
　　方法：1、實(shí)驗(yàn)分三組：A組：為無(wú)IL-1β預(yù)處理的BMMSCs對(duì)照組、B組：為IL-1β預(yù)刺激1天、C組：IL-1β每天預(yù)刺激1次，共連續(xù)處理7天。三組分別加入骨髓瘤細(xì)胞株H

2、929直接接觸共培養(yǎng)，3天后收集各組中H929細(xì)胞。觀察各組細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)狀況。
　　2、采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)各組BMMSCs的BMP-2的表達(dá)，同時(shí)加用NF-kB的抑制劑（Pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC），研究NF-kB通路在BMMSCs的BMP-2表達(dá)的影響。
　　3、采用 Western blot方法檢測(cè)各組H929細(xì)胞 NANOG、SOX2和OCT-4蛋白的表達(dá)水平。

3、r>　　4、采用RT-PCR方法檢測(cè)各組H929細(xì)胞因子CCR1、CCR2、CCR6、CXCR4、MCP-1、MIP-1α和DKK1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、倒置顯微鏡觀察示：各組BMMSCs均能在體外貼壁生長(zhǎng)。經(jīng) IL-1β預(yù)處理1 d和7 d后的BMMSCs，其形態(tài)與對(duì)照組均無(wú)明顯區(qū)別，均呈梭形。H929細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng)，部分細(xì)胞可聚集成串珠樣葡萄狀。單獨(dú)培養(yǎng)與共培養(yǎng)的BMMSCs、H929細(xì)胞，形態(tài)上無(wú)明顯差別。
　　

4、2、細(xì)胞免疫組化結(jié)果顯示：與組A組比較，B組、C組BMMSCs的BMP-2表達(dá)增高；用NF-kB的抑制劑PDTC預(yù)處理后，實(shí)驗(yàn)組B、C兩組BMP-2表達(dá)水平明顯降低。
　　3、Western blot結(jié)果顯示：與A組比較，H929細(xì)胞株和B組、C組共培養(yǎng)后，SOX2蛋白表達(dá)水平升高，且B組、C組SOX2蛋白表達(dá)水平的相對(duì)灰度值與A組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05；n=5）。A、B、C三組間NANOG、OCT-4蛋白的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、差異。
　　4、RT-PCR結(jié)果顯示：與A組、B組比較，H929細(xì)胞株和C組共培養(yǎng)后， CCR1、CCR2、MCP-1、MIP-1α基因的相對(duì)表達(dá)水平均增高，且其存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05；n=6）。但三組間CCR6、CXCR4、DKK1基因的相對(duì)表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：我們的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IL-1β單次或多次刺激正常骨髓 BMMSCs后，可增加BMMSCs的BMP-2表達(dá)，并且BMP-2表達(dá)的上調(diào)能被NF-k