高脂和糖尿病SD大鼠睪丸組織中Hsp60的表達變化研究.pdf

1、目的:復制雄性Sprague-Dawlay大鼠血脂異常以及2型糖尿病模型，并研究以上兩種疾病對中年SD大鼠生殖系統(tǒng)的影響，通過對睪丸內生精小管微結構變化和熱休克蛋白60(HSP60)表達差異，以及曲細精管中生精細胞凋亡數(shù)量的改變，研究熱休克蛋白60在大鼠睪丸中的表達情況與大鼠生精細胞凋亡數(shù)量變化間的聯(lián)系以及其可能的影響機制。
　　方法:挑選60只無特定病原體（SPF級）健康雄性Sprague-Dawlay大鼠，每只通過統(tǒng)計軟件編號

2、后隨機劃編成三個實驗組:對照組(n=15)、高脂組(n=15)、糖尿病組(n=30)。對照組全程使用基礎飼料喂養(yǎng);高脂組前期食用高脂飼料，24 W后在原有飼料基礎上添加丙硫氧嘧啶(PTU)，加重脂代謝異常;糖尿病組前期進食高脂飼料，24 W末腹腔注射鏈脲佐菌素進行糖尿病造模（對照組和高脂組采用檸檬酸注射液代替），完成注射后糖尿病大鼠更換為普通飼料。36周末大鼠尾靜脈采血檢測大鼠隨機血糖、血脂四項等指標，并剔除未成模大鼠。確定造模成功后處

3、死大鼠，迅速分離大鼠一側睪丸組織，放入Bouin固定液中室溫下浸泡48小時后送病理實驗室對標本包埋、切片;另一側睪丸組織離體后立即塞入凍存管后置于液氮罐中暫時保存，取材結束后統(tǒng)一移至負80度冰柜中長時間存放。通過免疫組化(SABC)檢測熱休克蛋白60蛋白表達情況及所在位置;光鏡分析HE染色切片，觀察大鼠睪丸曲細精管構造變化;蛋白質免疫印跡法(WesternBlot)分析大鼠睪丸組織中HSP60蛋白表達程度;通過TUNEL染色了解凋亡細胞

4、分布情況以及睪丸生精組織細胞凋亡水平。一切實驗數(shù)據(jù)搜集整理后經(jīng)過spss16.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理，以P＜0.05作為判別數(shù)據(jù)間具有顯著統(tǒng)計學差異的標準。
　　結果:通過隨機血糖以及血脂四項的檢測結果提示高脂和糖尿病SD大鼠模型成功建立。HE染色在鏡下觀可見對照組生精細胞按發(fā)育成熟順序由管壁向管腔逐層排列，數(shù)量較多。高脂及糖尿病大鼠睪丸曲細精管中細胞排布較對照組松散、混亂，且各級精母細胞數(shù)量出現(xiàn)下降，成熟精子細胞在管腔中央的

5、分布數(shù)量顯著下降，部分睪丸組織切片中可呈現(xiàn)生精細胞團塊與生精上皮分離;免疫組化顯示高脂組和糖尿病組大鼠睪丸HSP60表達高于對照組;Western Blot實驗發(fā)現(xiàn)高脂組和糖尿病組大鼠睪丸組織HSP60表達水平都出現(xiàn)顯著升高，對照組的目的蛋白表達水平表達則遠低于其他兩組。Tunel檢測可觀察到高脂組和糖尿病組睪丸組織凋亡細胞與對照組相比數(shù)量較多，糖尿病組細胞凋亡多于高脂組。
　　結論:糖尿病和高脂血癥可以使睪丸生精細胞凋亡數(shù)目上升