中華倉鼠卵巢細胞CMP-唾液酸轉運體基因的克隆及在大腸埃希菌中的表達.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩33頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的： 將中華倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary， CHO)細胞的CMP-唾液酸轉運體(CMP-sialic acid transporter， CMP-sat)基因進行克隆，并在大腸埃希菌中表達，為今后進一步研究該基因及其表達產物的作用奠定基礎。 方法： 1.在CHO細胞中提取總RNA。 2.RT-PCR擴增CHO細胞的CMP-sat基因。 3.構建CMP-sat基因的克隆載體

2、CMP/pMD18-T并測序鑒定。 4.構建CMP-sat基因表達質粒CMP/pET42a。 5.將CMP/pET42a在IPTG誘導下進行目的基因表達，表達產物進行SDS-PAGE鑒定。 結果： 1.在CHO細胞中提取的總RNA經瓊脂糖凝膠電泳檢測清晰可見18S和28S RNA帶，且28S帶的亮度是18S帶亮度的2倍左右。 2.CMP-sat基因的RT-PCR產物和PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳可見

3、1條1000bp左右的條帶，大小與報道的CMP-sat基因的理論報道大小相符，說明CMP-sat基因的RT-PCR是成功的，PCR擴增到了特異的目的基因片段。 3.構建的CMP/pMD18-T克隆載體中目的基因片段的測序結果與Genbank公布的中華倉鼠CMP-sat基因序列完全相同。 4.重組的表達質粒CMP/pET42a在IPTG誘導下表達的蛋白質經SDS-PAGE電泳顯示有清晰的蛋白表達條帶，相對分子量約為36.4

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論