bFGF單抗聯(lián)合紫杉醇(Taxol)抑制MCF-7及耐藥株MCF-7-Taxol的增效作用的分子機制.pdf

1、目的：本研究主要目的是：
　　1.研究bFGF單抗聯(lián)合紫杉醇（Taxol）抑制MCF-7細胞增殖，誘導細胞凋亡的分子機制；
　　2.探討bFGF單抗聯(lián)合Taxol對耐藥株MCF-7/Taxol的增效作用的分子機制。
　　方法：制備腹水型bFGF單抗，體外培養(yǎng)MCF-7細胞和乳腺癌耐紫杉醇的耐藥株MCF-7/Taxol，實驗中將兩種細胞均分為四組，Control組、bFGF單抗組、Taxol組及 bFGF單抗+Taxol

2、組處理，并用相應的藥物對細胞進行處理。
　?。?）用CCK-8法檢測bFGF單抗聯(lián)合Taxol對MCF-7，MCF-7/Taxol細胞的增殖抑制率，比較四組間的細胞增殖抑制率。
　?。?）使用流式細胞儀AnnexinV-FITC/PI雙染檢測MCF-7，MCF-7/Taxol細胞在不同藥物組處理下的細胞凋亡的情況。
　　（3）使用Western blot檢測與MCF-7和MCF-7/Taxol增殖，凋亡相關信號通路蛋白

3、的表達變化用以揭示bFGF單抗聯(lián)合Taxol抑制MCF-7的分子機制以及對于MCF-7/Taxol的增效作用。用Western blot檢測了蛋白Raf-1，Erk，p-Erk，JNK，p-JNK，STAT3，p-STAT3，Caspase3，cleaved-Caspase3，PARP，cleave-PARP，Bax，Bcl的表達變化。
　　結果：
　?。?）CCK-8實驗結果顯示bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，M

4、CF-7/Taxol后對其增殖抑制率分別提高了13.40％-36.50%；9.56%-26.87%，聯(lián)合用藥能增強對細胞抑制作用。
　?。?）流式結果顯示bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，MCF-7/Taxol后PI，F(xiàn)ITC雙陽性率分別提高了17.10%-23.20%；20.00%-22.70%，表明聯(lián)合能增強對凋亡促進作用。
　?。?）Western Blot結果顯示MCF-7，MCF-7/Taxol中MabD9

5、+Taxol組能明顯下調(diào)Raf-1，p-Erk，p-STAT3，Bcl-2，Caspase3，并上調(diào)p-JNK，Bax，cleavedCaspase3，cleavedPARP，其中Raf-1在MCF-7/Taxol中表達量較MCF-7明顯下降。
　　結論：
　?。?）bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，MCF-7/Taxol后對其增殖抑制率分別提高了13.40%-36.50%；9.56%-26.87%，聯(lián)合用藥能增強對

6、細胞抑制作用。結果顯示bFGF單抗聯(lián)合Taxol作用MCF-7，MCF-7/Taxol后PI，F(xiàn)ITC雙陽性率分別提高了17.10%-23.20%；20.00%-22.70%，表明聯(lián)合能增強對凋亡促進作用。
　　（2）本研究揭示了bFGF單抗聯(lián)合Taxol抑制MCF-7的如下機制：加強了對Erk/MAPK通路的抑制，并加強上調(diào)p-JNK，下調(diào)p-STAT3的表達量，引起B(yǎng)cl-2表達量下調(diào)，Bax表達上調(diào)，Caspase3，cle

7、aved Caspase3，cleaved PARP表達變化引起細胞凋亡。
　?。?）bFGF單抗聯(lián)合Taxol抑制MCF-7紫杉醇耐藥株(MCF-7/Taxol)增效作用的分子機制與作用于親本株的機制基本一致，同樣是抑制Erk/MAPK通路，并上調(diào)p-JNK，下調(diào)p-STAT3的表達量，引起B(yǎng)cl-2表達量下調(diào)，Bax表達上調(diào)，Caspase3，cleaved-Caspase3，cleaved-PARP表達變化引起細胞凋亡，bF