胎兒干細(xì)胞的分離鑒定和干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞惡性表型影響的研究.pdf

1、該研究分為以下二個部分:第一部分,建立體外培養(yǎng)胎兒干細(xì)胞的有效方法,為研究干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞惡性表型的影響提供理想的干細(xì)胞來源.該實驗室應(yīng)用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),從4-6個月引產(chǎn)胎兒的骨髓、肝臟、腎臟、心肌、骨骼肌和胃腸等組織中分離培養(yǎng)干細(xì)胞.顯微鏡下觀察:培養(yǎng)的原代細(xì)胞生長健康,增殖較快,且細(xì)胞形態(tài)具有一定的組織特異性.同時對骨髓第3代細(xì)胞進(jìn)行干細(xì)胞標(biāo)志物的生物學(xué)鑒定.結(jié)果顯示:97.2﹪的細(xì)胞呈CD105陽性,66.0﹪的細(xì)胞呈CD106

2、陽性,9.2﹪的細(xì)胞呈CD34陽性,陰性對照組結(jié)果為0.5﹪.生物學(xué)鑒定的初步結(jié)果顯示,從胎兒骨髓組織中分離培養(yǎng)成功的細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs).該研究成功地建立了體外培養(yǎng)胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的有效方法,所獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞純度較高,增殖較快,適用于干細(xì)胞生物學(xué)和組織工程學(xué)的研究.第二部分,探討間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞惡性表型的影響.采用人胎兒皮膚真皮層的間充質(zhì)干細(xì)胞(Z3細(xì)胞)作用于

3、人肝癌細(xì)胞系H7402、人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和高轉(zhuǎn)移傾向人乳腺癌細(xì)胞系LM-MCF-7(具有高轉(zhuǎn)移傾向,為MCF-7細(xì)胞的轉(zhuǎn)移亞細(xì)胞克隆).首先,將相同細(xì)胞數(shù)量(1 X 10<'7>)的Z3與H7402細(xì)胞混合后,共同接種SCID(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠.結(jié)果發(fā)現(xiàn),對照組5只SCID鼠接種H7402肝癌細(xì)胞(1 X 10<'7>)7-10天后均成瘤;實驗組4只SCID鼠混合接

4、種Z3細(xì)胞和H7402細(xì)胞后在36-37天時有2只成瘤,在49天時有1只成瘤,在70天時仍有1只未成瘤.結(jié)果顯示,與對照組相比,實驗組成瘤時間明顯延長或不成瘤.為了驗證上述結(jié)果,用相同細(xì)胞數(shù)目(1 X 10<'7>)的Z3與MCF-7細(xì)胞和LM-MCF-7細(xì)胞分別混合后各接種4只SCID鼠.結(jié)果顯示,對照組接種MCF-7細(xì)胞后成瘤時間為7.7天;實驗組接種Z3/MCF-7細(xì)胞后成瘤時間為22.3天;接種LM-MCF-7細(xì)胞的對照組成瘤時

5、間為5天;接種Z3/LM-MCF-7細(xì)胞的實驗組成瘤時間為14.3天.接種后30天時處死小鼠,病理觀察顯示,對照組出現(xiàn)廣泛轉(zhuǎn)移,而混合接種的小鼠各組織中均未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移.結(jié)果發(fā)現(xiàn):混合接種的小鼠成瘤時間明顯延長,腫瘤形成體積明顯減小,說明干細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞具有抑制作用,且這種抑制作用與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有關(guān).綜上所述,該研究成功地建立了體外分離培養(yǎng)胎兒間充質(zhì)干細(xì)胞的方法,為研究干細(xì)胞與腫瘤相互關(guān)系提供了理想的細(xì)胞來源.間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞