尿路致病性大腸桿菌在感染中與尿路上皮屏障之間的相互作用.pdf

1、第一部分尿路致病性大腸桿菌感染量和葡糖氨基葡聚糖與初始尿路感染之間的關(guān)系
　　目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究尿路致病性大腸桿菌（uropathogenic Escherichia coli,UPEC）的量與膀胱葡糖氨基葡聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）層的狀況與初始尿路感染之間的關(guān)系。
　　方法：80只雌性小鼠隨機(jī)分為魚(yú)精蛋白灌注組(PS,40只)，對(duì)照組（40只）PS組灌注魚(yú)精蛋白溶液30min,而對(duì)照組灌注無(wú)

2、菌生理鹽水30min。每一組又分別分為4個(gè)亞組，每個(gè)亞組10只小鼠，通過(guò)膀胱灌注的方式，每實(shí)驗(yàn)組中4個(gè)亞組的小鼠分別接受不同梯次的UPEC感染分別為102,103,104,105CFU，在感染12h后，在收集小鼠尿液標(biāo)本后，小鼠被處死，獲取膀胱標(biāo)本，膀胱與尿液的載菌量分別被確定。
　　結(jié)果：除了105CFU的亞組外，兩組的膀胱載菌量有著顯著的不同，對(duì)照組的膀胱載菌量明顯的低于PS組。與對(duì)照組相比，在102和103 CFU感染劑量下

3、，PS組的小鼠對(duì)UPEC更加易感，其膀胱載菌陽(yáng)性的發(fā)生率更高。但是，在104和105CFU的感染劑量下，兩組膀胱載菌陽(yáng)性的發(fā)生率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在102的感染計(jì)量下，PS組的小鼠也可以發(fā)生膀胱壁陽(yáng)性載菌的事件，另外不是所有膀胱載菌陽(yáng)性的小鼠尿細(xì)菌培養(yǎng)可以檢測(cè)到細(xì)菌的存在。
　　結(jié)論：GAGs層的破壞可以顯著提高膀胱對(duì)UPEC的易感性。
　　第二部分抗生素治療后尿細(xì)菌培養(yǎng)陰性的情況下尿路致病性大腸桿菌在女性膀胱中持續(xù)存在

4、r>　　目的：研究與驗(yàn)證罹患復(fù)發(fā)性尿路感染（UTI）的女性病人在抗生素治療尿液細(xì)菌培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰后，是否存在尿路致病性大腸桿菌的持續(xù)定植，為驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)菌群（intracellular bacterial communities，IBCs）病理循環(huán)理論提供進(jìn)一步的證據(jù)。
　　方法：研究對(duì)象為具有非復(fù)雜性復(fù)發(fā)性尿路感染病史的32名女性病人，在其中一次感染，經(jīng)過(guò)足夠的抗生素治療后，收集其干凈尿液和經(jīng)膀胱鏡活檢膀胱上皮標(biāo)本，分別經(jīng)過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)

5、、菌種鑒定等常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢測(cè)。并通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）來(lái)檢測(cè)細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)生組別與鑒定16個(gè) UPEC毒性因子（virulence factors，VFs)。UPEC的感染能力是通過(guò)利用小鼠感染模型來(lái)驗(yàn)證的，免疫熒光和電子顯微鏡來(lái)檢測(cè)IBCs的形成。
　　結(jié)果：32名的女性病人的尿液經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)均為細(xì)菌陰性。其中有6例病人的膀胱活檢組織中培養(yǎng)出了大腸桿菌。經(jīng)瓊脂糖凝膠 PCR檢

6、測(cè)顯示：所有的細(xì)菌都屬于尿路致病性大腸桿菌，且表達(dá)的VFs各有不同。所有被檢測(cè)出的UPEC均有在小鼠感染模型中形成IBCs的能力。
　　結(jié)論：即便經(jīng)過(guò)抗生素治療，具有鮮明毒性特點(diǎn)和致病特征的UPEC首先在尿路上皮活檢中被檢測(cè)出，IBCs病理循環(huán)也確實(shí)可能在人類的泌尿道存在，并且在感染過(guò)程中起到重要的作用。
　　第三部分1型菌毛粘附素fimH誘導(dǎo)尿路上皮凋亡和抑制GAGs合成相關(guān)酶類表達(dá)的研究
　　目的：研究UPEC一類

7、菌毛粘附素fimH對(duì)人永生化尿路上皮細(xì)胞SV-HUC-1凋亡的影響以及對(duì)其GAGs相關(guān)合成酶的表達(dá)的影響。
　　方法：采用不同濃度的fimH作用于尿路上皮SV-HUC-1細(xì)胞后，Annexin V-FITC/PI雙染和流式細(xì)胞儀（FCM）分析細(xì)胞的凋亡情況；實(shí)時(shí)定量PCR與 Western blot檢測(cè)GAGs合成相關(guān)酶類包括木糖基轉(zhuǎn)移酶1(Xylt1, xylosyltransferase1)木糖基轉(zhuǎn)移酶2(Xylt,1xylo

8、syltransferase2)硫酸乙酰肝素6-O-硫酸基轉(zhuǎn)移酶1[Heparan sulfate6-O-sulfotransferase1（Hs6st1）] N-去乙酰化酶/磺基傳遞酶(氨基乙酰肝素)1[N-deacetylase/ N- sulfotransferase(heparan glucosaminyl)1,（Ndst1）]硫酸乙酰肝素3-O-硫酸基轉(zhuǎn)移6[Heparan sulfate(glucosamine)3-O-su

9、lfotransferase6,（Hs3st6）]透明質(zhì)酸合成酶1[hyaluronan synthase1(Has1)]的在mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：fimH促進(jìn) SV-HUC-1細(xì)胞的凋亡，并且此作用具有濃度依賴性，與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。并且fimH可以在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平上明顯下調(diào)GAGs相關(guān)合成酶類的表達(dá)。
　　結(jié)論：fimH可以抑制人永生化尿路上皮SV-HUC-1細(xì)胞增殖