蛛絲蛋白工程菌高密度發(fā)酵、表達產物純化與濕法紡絲.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蜘蛛絲尤其是由蜘蛛大囊狀腺產生的拖絲,具有質地輕、富有彈性、強度高等優(yōu)良的特性,作為生物材料具有廣泛的應用前景,基因工程技術為大規(guī)模生產蛛絲蛋白提供了可能途徑.該論文研究了重組蛛絲蛋白工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)與重組蛛絲蛋白的純化工藝,并制備了重組蛛絲蛋白紡絲液,進行了濕法紡絲的嘗試,在國內首次報道了利用重組蛛絲蛋白進行紡絲并測定了纖維的部分性能.研究了重組質粒pNS2在兩種宿主菌中的搖瓶與10L發(fā)酵罐培養(yǎng)表達情況,確定了較適的宿主菌為BL21(

2、DE3),采用pH-stat補料分批發(fā)酵,工程菌pNS2/BL21(DE3)最終菌體密度OD<,600>達71.64,表達量為0.8g/L.重組蛋白以可溶性的形式表達,等電聚焦電泳測定其等電點為8.5,通過超聲破碎細胞,調節(jié)pH5.6,55~60℃加熱4min,20%飽和(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀等步驟,重組蛋白的純度可達92%,回收率達57.5%.建立了簡單、高效的規(guī)模純化工藝.純化的蛋白經透析及冷凍干燥后,選擇甲酸作為

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