黃芪、脈絡(luò)寧注射液載入修飾膠原對(duì)促血管新生的協(xié)同作用.pdf

1、【背景】由人工方法合成臨床所需要的組織和器官，并尋找可使支架內(nèi)快速血管化的方法稱為組織工程學(xué)。血管生成（Angiogenesis，angei-anagenesis）在促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和組織修復(fù)起著重要的作用。有研究表明，黃芪、脈絡(luò)寧注射液可能具有一定的促血管生成作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和DNA的合成，抑制細(xì)胞凋亡，上調(diào)多種促血管生長(zhǎng)因子如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascularendothelialcellgrowthfacto

2、r,VEGF)、血小板衍化生長(zhǎng)因子（platelet-derivedgrowthfactor，PDGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)等的表達(dá)，提高組織細(xì)胞血紅蛋白和羥脯氨酸含量有關(guān)。按5:1的配比將黃芪與當(dāng)歸作用于CAM上，在血管新生和血管計(jì)數(shù)方面，其結(jié)果在血管新生及計(jì)數(shù)方面均顯著比其他配比組及生理鹽水空白組要好，在促進(jìn)CAM血管新生方面具有更好的作用。盡管許多方面均已證實(shí)

3、中藥在體內(nèi)優(yōu)化促血管生長(zhǎng)因子的作用，其局限性在于僅停留在口服和靜脈給藥方面，我們?cè)谶^(guò)去的研究中已闡明黃芪微乳載入修飾后膠原和VEGF對(duì)CAM血管新生具有相似的促進(jìn)作用。
　　 【目的】通過(guò)將黃芪、脈絡(luò)寧注射液載入修飾后膠原，觀察對(duì)促CAM血管新生的療效，并證明黃芪與脈絡(luò)寧之間的協(xié)同作用，同時(shí)探討黃芪-脈絡(luò)寧膠原對(duì)血管新生的細(xì)胞學(xué)影響及其可能的機(jī)制，為其應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
　　 【方法】用肝素鈉修飾Ⅰ型膠原，將黃芪注

4、射液、脈絡(luò)寧注射液及二者混合液加于修飾好的膠原上。實(shí)驗(yàn)共分為5組，不加任何處理的單純雞胚孵化為空白組、將膠原放入雞胚尿囊膜上為控制組、膠原中載入1mL黃芪注射液為黃芪組、膠原中載入1mL脈絡(luò)寧注射液為脈絡(luò)寧組、膠原中載入各0.5mL黃芪注射液及脈絡(luò)寧注射液為黃芪+脈絡(luò)寧組，30min后將各組植入雞胚尿囊膜孵化，7d后取出，觀察雞胚存活情況及尿囊膜血管生長(zhǎng)形狀，利用格子法計(jì)數(shù)雞胚尿囊膜內(nèi)和各組膠原內(nèi)不重復(fù)的3個(gè)視野毛細(xì)血管(50×)，采用

5、光度計(jì)法測(cè)定各組血紅蛋白含量，同時(shí)取創(chuàng)面中心肉芽組織，做病理CD31免疫組化后隨機(jī)取3個(gè)視野對(duì)rhVEGF165陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。應(yīng)用增殖、遷移、管腔形成實(shí)驗(yàn)觀察黃芪-脈絡(luò)寧膠原對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞在血管新生各階段的作用，用WesternB1ot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)。
　　 【結(jié)果】各實(shí)驗(yàn)組雞胚尿囊膜內(nèi)血管呈輪輻狀生長(zhǎng)及雞胚尿囊膜包裹標(biāo)本率高于空白組與控制組，雞胚尿囊膜內(nèi)微血管數(shù)、膠原內(nèi)微血管數(shù)、血紅蛋

6、白含量、rhVEGF165陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均高于控制組，差異有顯著性意義(P＜0.01);其中黃芪+脈絡(luò)寧組又高于黃芪組與脈絡(luò)寧組，差異有顯著性意義(P＜0.05)。黃芪-脈絡(luò)寧膠原能明顯促進(jìn)大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率，與對(duì)照組比較，增加了90.22％(P＜0.01)；遷移率增加了211.43％(P＜0.01)；管腔形成數(shù)是對(duì)照組的2.46倍(P＜0.01)；同時(shí)刺激內(nèi)皮細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)增加了63.8％(P＜0.01)。