沉香化氣丸的質量控制及物質基礎研究.pdf

1、沉香化氣丸收載于《中國藥典》（2015年版）中，全方由沉香、木香、廣藿香、醋香附、陳皮、砂仁、醋莪術、六神曲（炒）、炒麥芽、甘草十味藥構成。有理氣疏肝，消積和胃之功效，常用于治療胃潰瘍、消化性不良、脘腹脹痛等疾病。目前，對于沉香化氣丸復方的研究僅局限于基本的藥材鑒別、藥效研究和少量成分的含量測定，難以說明沉香化氣丸的整體藥效和“多成分、多靶點、多途徑”整合治療作用的特點，無法科學反映其內在質量。
　　因此本課題將利用UPLC-Q-

2、TOF/MS技術對沉香化氣丸的化學成分進行定性分析及口服給藥后藥物在體內代謝的研究，著眼于分析沉香化氣丸體內和體外化學成分的變化，為進一步闡明沉香化氣丸的藥效物質基礎具有重要意義。同時建立中藥指紋圖譜技術與多種指標成分含量測定的分析方法，對中藥復方的整體性質量進行控制，為沉香化氣丸的質量控制提供科學依據。本論文的實驗研究從以下四個方面進行：
　　一、基于UPLC-Q-TOF/MS快速鑒別沉香化氣丸中化學成分的研究
　　采用U

3、PLC-Q-TOF/MS技術對中藥復方沉香化氣丸中的化學成分進行定性分析。實驗采用Phenomenex Kinetex C18色譜柱（4.6mm×100mm，2.7μm），流動相為乙睛-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫，體積流量為0.8mL·min-1；采用電噴霧源（ESI）正、負離子模式下分別采集數據。根據化合物準確的相對分子質量、二級碎片離子信息、相關參考文獻數據及對照品對照，從沉香化氣丸中分離和鑒定出73個化學成分，包括36個黃酮類、

4、16個2-（2-苯乙基）色酮類、7個三萜皂苷類、2個倍半萜內酯及12個其他類成分。本實驗表明UPLC-Q-TOF/MS聯用技術為鑒別沉香化氣丸中化學成分提供簡便、快速、準確的方法，該研究為進一步分析沉香化氣丸的藥效物質基礎及質量控制提供了研究基礎。
　　二、沉香化氣丸UPLC指紋圖譜與化學模式識別研究
　　建立沉香化氣丸的超高效液相色譜（UPLC）指紋圖譜，為評價該制劑的整體質量提供參考依據。采用Phenomenex Kin

5、etex C18（4.6mm×100mm，2.7μm）色譜柱，流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，體積流量為0.8mL·min-1；柱溫35℃；分段變波長測定：0～3min，285nm；3～20min，210nm；20～24min，254nm；24～42min，210 nm。采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012版）”對20批沉香化氣丸樣品計算相似度。建立了20批沉香化氣丸指紋圖譜，標定了27個共有峰，通過對照品指認了1

6、2個共有峰，20批樣品相似度均大于0.98，共有峰保留時間的RSD＜0.5%，峰面積的RSD比較大，表明各批次的樣品化學成分較為相似，但其成分的含量存在一定差異。通過聚類分析可將樣品聚為3類，并結合主成分分析、正交偏最小二乘法判別分析法，發(fā)現蕓香柚皮苷、橙皮苷、甘草苷、木香烴內酯等7個成分是造成不同批次樣品差異性的主要標記物。指紋圖譜的構建與化學模式識別為沉香化氣丸的質量控制提供更全面的參考。
　　三、UPLC波長切換法同時測定沉

7、香化氣丸中7種成分的含量
　　建立UPLC波長切換法同時測定沉香化氣丸中甘草苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸、木香烴內酯和廣藿香酮的含量測定方法。采用Phenomenex Kinetex C18色譜柱（4.6mm×100mm，2.7μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，流速0.8mL·min-1，波長切換（0～20min，210nm，檢測甘草苷、蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷；20~25min，254nm，檢測甘

8、草酸；25～30.8min，210nm，檢測木香烴內酯；30.8～34min，310nm，檢測廣藿香酮），柱溫35℃。7種有效成分與相鄰峰達到基線分離，7種成分的峰面積與濃度呈良好的線性關系（r=0.9994～1.0000）；平均加樣回收率（n=6）范圍為98.7%～101.7%，RSD均小于2.88%；方法重復性（n=6）的RSD均小于2.93%；供試品溶液在室溫條件下24h內穩(wěn)定，RSD均小于1.81%。該方法快速、準確度高、靈敏度

9、高，專屬性強，為沉香化氣丸的質量標準研究提供參考。
　　四、沉香化氣丸在大鼠體內的入血成分及代謝產物研究
　　采用UPLC-Q-TOF/MS技術檢測沉香化氣丸后大鼠血漿及尿樣中的入血成分及代謝產物。實驗采用Phenomenex Kinetex C18色譜柱，流動相為乙睛-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，體積流量為0.8mL·min-1；采用電噴霧源（ESI）下采集數據。對空白大鼠與給藥大鼠血漿和尿樣的總離子流圖，進行提取目標離