甘藍夜蛾中兩種不同類型幾丁質脫乙酰基酶基因的克隆與表達研究.pdf

1、昆蟲蛻皮是一個復雜的生理過程,在這個過程中有多種酶、激素和受體分子參與其中。本研究對在其中分解幾丁質起到重要作用的幾丁質脫乙?；富蜻M行了初步研究。通過破壞昆蟲幾丁質脫乙?；负铣苫蚪到馔緩綄ハx非常有害,在實際應用中使其成為害蟲生物防治的又一靶標。
　　 幾丁質(chitin)又稱甲殼素、甲殼質等,是由N-乙酰-D-葡萄糖胺通過β-1,4糖苷鍵連接而成的直鏈高分子化合物。在自然界中,幾丁質存在于真菌及藻類的細胞壁、無脊椎動

2、物的外骨骼及表皮中,是自然界中僅次于纖維素的第二大可再生自然資源。研究證明,幾丁質是昆蟲表皮和圍食膜的重要組成成分,昆蟲生長、發(fā)育的各個時期都需要一定量的幾丁質。
　　 幾丁質脫乙?；?chitin deacetylase,簡稱CDA,EC.3.5.1.41)。CDA來源廣泛,如真菌、酵母和昆蟲中都發(fā)現(xiàn)CDA的存在,是幾丁質降解酶系成員之一,能夠催化幾丁質中β-1,4糖苷鍵連接的N-乙?；咸前返囊阴０坊乃?可以將幾丁質轉

3、化為殼聚糖,在是昆蟲幾丁質代謝中一種關鍵酶,在昆蟲的多種生理活動中發(fā)揮重要作用。
　　 本研究以甘藍夜蛾Mamestrabrassicae5齡幼蟲蟲體為材料提取總RNA,利用RT-PCR和RACE技術,分別擴增得到甘藍夜蛾的2種不同幾丁質脫乙酰基酶基因的cDNA序列。其中一種CDA含有2036個堿基,包括一個1617個堿基的開放讀碼框,編碼一個含539個氨基酸的蛋白,分子量約為61.5KDa,我們定義其為cDNA1;另一種CDA

4、含有1312個堿基,包括一個1173個堿基的開放閱讀框,編碼一個含390個氨基酸的蛋白,分子量約為44.1Kda,我們定義其為cDNA2。cDNA1推導的氨基酸序列具有幾丁質脫乙酰基酶典型的三個功能區(qū),分別是幾丁質結合區(qū),催化區(qū)和低密度脂蛋白受體區(qū),屬于CDA第1組(groupⅠ)的成員。cDNA2推導的氨基酸序列只有幾丁質催化區(qū),屬于CDA第5組(groupⅤ)的成員。利用RT-PCR進行該基因在mRNA水平上的表達表明幾丁質脫乙酰基