D-環(huán)絲氨酸對條件性恐懼消退訓(xùn)練大鼠行為及海馬BDNF及其受體TrkB的影響研究-.pdf

1、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(posttraumatic stress disorder， PTSD)是個體經(jīng)歷威脅性事件或嚴(yán)重創(chuàng)傷時，延遲出現(xiàn)并長期持續(xù)的一種精神障礙。近年來，隨著各種災(zāi)難性事件的頻繁發(fā)生，PTSD 發(fā)病率呈上升趨勢，然而PTSD的發(fā)病機(jī)制并不是很清楚，導(dǎo)致其治療存在很多難點(diǎn)。臨床常采用暴露療法治療PTSD，然而約40％患者已消退的恐懼記憶容易再現(xiàn)，暴露療法的原理為條件性恐懼記憶的消退，因此研究消退記憶長期保持的機(jī)制對促進(jìn)PTSD的

2、臨床治療效果具有十分重要的意義。
　　 海馬是學(xué)習(xí)記憶的重要腦區(qū)，海馬內(nèi)神經(jīng)元的長時程增強(qiáng)效應(yīng)(LTP)是長時記憶的神經(jīng)基礎(chǔ)。PTSD與海馬結(jié)構(gòu)與功能的異常存在密切聯(lián)系。BDNF能夠促進(jìn)神經(jīng)元的分化生長，增強(qiáng)突觸可塑性，促進(jìn)長時記憶的保持，在條件性恐懼消退記憶的保持中具有重要作用。海馬BDNF 可能對條件性恐懼消退的長期保持具有重要的作用。本研究通過D-環(huán)絲氨酸(DCS)系統(tǒng)給藥，觀察恐懼消退訓(xùn)練后不同時間點(diǎn)的消退保持成績與海馬

3、內(nèi)BDNF及其受體TrkB的關(guān)系，為進(jìn)一步認(rèn)識消退的機(jī)制、尋找治療PTSD的新靶點(diǎn)、提高PTSD 臨床治療的效果提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組、消退對照組(不進(jìn)行消退訓(xùn)練)、消退組、DCS+消退組(消退訓(xùn)練前腹腔注射DCS)與消退+DCS組(消退訓(xùn)練后腹腔注射DCS)。利用聲音-電擊配對建立條件性恐懼動物模型，24h后利用相同的聲音刺激進(jìn)行消退訓(xùn)練，在消退訓(xùn)練后1d、3d、7d時測量僵立行為和曠場行為。利用we

4、stern blot技術(shù)檢測正常對照組、消退組與消退+DCS組的海馬內(nèi)BDNF與TrkB 受體的水平。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)一結(jié)果：
　　 1.僵立行為測試：消退對照組與消退組的僵立時間百分比隨時間進(jìn)展整體呈下降趨勢。與正常對照組相比，消退對照組與消退組大鼠的僵立時間百分比均顯著升高(p＜0.01)，且消退對照組顯著高于消退組(p＜0.05)。消退+DCS組的僵立時間百分比顯著低于消退組及DCS+消退組 (p

5、＜0.01)。消退訓(xùn)練后DCS 干預(yù)大鼠3天組與7天組的僵立時間百分比與1天組相比均具有顯著的差異(p＜0.01)。
　　 2.曠場行為測試：
　　 總路程在各組間均無顯著差異。消退對照組與消退組的中央路程百分比(％)與正常對照組相比均顯著降低(p＜0.01)。消退對照各時間組及消退1天組的站立次數(shù)均顯著低于正常對照組(p＜0.01)，消退3、7天組的站立次數(shù)與正常對照組比較則無顯著差異，且消退對照組與消退組各對應(yīng)的時間

6、點(diǎn)上的站立次數(shù)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 消退對照組內(nèi)，中央路程百分比(％)在3天組與7天組之間存在顯著差異(p＜0.01)，其余差異均不顯著。消退組內(nèi)，中央路程百分比(％)的3天組和7天組均與1天組存在顯著差異(p＜0.05)。與正常對照組相比，DCS+消退組的中央路程百分比在各時間點(diǎn)均顯著降低(p＜0.05)。消退+DCS組在1天和3天時的中央路程百分比顯著低于正常對照組(p＜0.05)，7天時的中央路程百分比則與正常對照組

7、無顯著差異。DCS+消退組7天時的中央路程百分比顯著高于1天和3天(p＜0.05)。消退+DCS組7天時的中央路程百分比顯著高于1天和3天(p＜0.05)。
　　 與正常對照組相比，DCS+消退組與消退+DCS組在各時間點(diǎn)的站立次數(shù)均顯著降低(p＜0.05)。DCS+消退組與消退+DCS組在各時間點(diǎn)的站立次數(shù)與消退組相比均無顯著差異。DCS+消退組與消退+DCS組組內(nèi)三個時間點(diǎn)之間站立次數(shù)比較均無顯著差異。
　　 實(shí)驗(yàn)二

8、結(jié)果：
　　 1.海馬BDNF水平：消退組與消退+DCS組在消退訓(xùn)練后1d、3d時的BDNF表達(dá)水平均明顯下降(p＜0.05)，7d時的BDNF表達(dá)水平與正常對照組比較則無顯著的差異。消退組與消退+DCS組7d時的BDNF水平較各同組內(nèi)1d、3d時均顯著升高(p＜
　　 0.05)，而1d與3d的BDNF蛋白水平兩組均無顯著差異。消退組與消退+DCS組在1d與7d時兩組間BDNF水平無顯著差異，而3天時消退+DCS組的B

9、DNF水平則顯著高于消退組(p＜0.05)。
　　 2.海馬TrkB水平：與正常對照組相比，消退組大鼠的TrkB表達(dá)水平顯著下降(p＜0.05)。消退組7d時的TrkB表達(dá)水平顯著高于1d及3d時(p＜0.05)。消退+DCS組消退訓(xùn)練后1d與3d時的TrkB表達(dá)水平顯著低于正常對照組(p＜0.05)，7d時的表達(dá)水平與正常對照組相比則無顯著差異。消退+DCS組7d時的TrkB表達(dá)水平顯著高于1d及3d時(p＜0.05)。消退組

10、與消退+DCS組在1d與3d時兩組間BDNF水平無顯著差異，而7天時消退+DCS組的BDNF水平則顯著高于消退組(p＜0.05)3. 消退組與消退+DCS組第1、3、7天CA1區(qū)BDNF與CA3 區(qū)TrkB 陽性細(xì)胞數(shù)呈逐漸增加趨勢，消退+DCS組第7天基本恢復(fù)正常。
　　 結(jié)論:
　　 1.DCS 系統(tǒng)給藥，促進(jìn)了條件恐懼消退記憶的長期保持的同時，亦促進(jìn)了大鼠海馬BDNF及其高親和力受體TrkB的表達(dá)。BDNF通過與其

11、高親和力受體TrkB 結(jié)合來發(fā)揮其對學(xué)習(xí)與記憶的作用。由此可以推測，NMDA 受體介導(dǎo)的分子信號通路在條件恐懼消退記憶的長期保持過程中發(fā)揮著重要的作用。作為NMDA 受體信號通路的下游物質(zhì)，BDNF與其受體TrkB在消退長時記憶的鞏固及保持起著關(guān)鍵的作用。
　　 2.DCS的給藥時機(jī)，對條件性恐懼消退記憶的影響表明消退訓(xùn)練前給藥不能促進(jìn)消退記憶的保持，而消退訓(xùn)練后給藥則能夠有效地促進(jìn)條件恐懼消退記憶的長期保持與鞏固。提示臨床治療