SPARC基因抑制骨髓增生異常綜合征(MDS)細胞增殖的作用機制.pdf

1、目的:構建干擾SPARC基因表達和過表達載體，轉染人骨髓增生異常綜合征(MDS)細胞株SKM-1細胞，探討SPARC基因差異性表達對人MDS細胞株SKM-1細胞增殖凋亡的影響。
　　方法:以SPARC-RNAi-LV, pcDNA-SPARC為模板的引物用PCR擴增SPARC基因，將靶基因克隆入慢病毒載體，構建含有SPARC基因的重組慢病毒載體SPARC-RNAi-LV, pGC-GV-SPARC，測序檢測正確性;將構建載體轉染人

2、MDS細胞株SKM-1，流式細胞術檢測轉染效率，RT-PCR檢測SKM-1細胞中SPARC mRNA表達，Western blot檢測SPARC蛋白表達，MTS法測定細胞增殖及小劑量阿糖胞苷(30ng/ml)對過表達實驗組增殖抑制的影響，AnnexinⅤ檢測SPARC基因轉染后或過表達組加阿糖胞苷后對人SKM-1細胞凋亡的影響。
　　結果:構建含有SPARC基因的重組慢病毒載體轉染效率60％左右，轉染后SPARC mRNA及蛋白表

3、達在靶細胞中較對照組均有明顯改變。小劑量阿糖胞苷作用于SPARC過表達組對轉染組的增殖抑制率明顯高于其他組。SPARC基因轉染后人SKM-1細胞凋亡率較未轉染組明顯，SPARC過表達組加入阿糖胞苷后人SKM-1細胞凋亡率較對照組顯著增高。
　　結論:成功構建了攜人SPARC基因的慢病毒載體，轉染人SKM-1細胞株后穩(wěn)定表達SPARC基因，SPARC的改變可影響細胞增殖，此外SPARC過表達聯(lián)合小劑量阿糖胞苷(30ng/ml)更有效